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甘油激酶（GK）活性试剂盒
价格：￥1010
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：48T 原产地：中国大陆 发布时间：2023/12/6 10:47:08更新时间：2024/10/11 14:01:12
产品摘要：我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多，质量好，灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。可以代检测（为您节省时间）具体价格请lai电咨询
产品完善度： 访问次数：159
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
甘油激酶（GK）活性测定试剂盒说明书
（货号：WS9190F 分光法 48 样）
一、产品简介：
甘油激酶（GK，EC 2.7.1.30）是甘油代谢中的限速酶，催化甘油磷酸化产生 3-磷酸甘
油，3-磷酸甘油在 3-磷酸甘油脱氢酶的作用下产生磷酸二羟丙酮，进入糖酵解途径氧化分
解释放能量。该酶的缺乏将直接导致细胞不能利用甘油。
本试剂盒采用甘油激酶催化 Mg-ATP 依赖的甘油磷酸化为 3-磷酸甘油，3-磷酸甘油在
磷酸甘油氧化酶的作用下产生过氧化氢，过氧化氢与显色剂反应在 510nm 处有大吸收
峰。通过测定 510nm 处的增加速率即可得出甘油激酶的酶活力大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
用甩几下或离心使粉剂落入底
部，临用加 1.1mL 蒸馏水溶解
备用。用不完的试剂 4℃保存。
试剂二
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
用甩几下或离心使粉剂落入底
部，临用加 2.2mL 蒸馏水溶解
备用。用不完的试剂 4℃保存。
试剂三
液体 12mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
液体 mL×1 支
4℃保存
用甩几下或离心使试剂落入底
部，临用加 4.4mL 蒸馏水溶解
备用。用不完的试剂 4℃保存。
标准品
液体 1 mL×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 的玻璃比色皿（光径 1cm）、可调试移液器、台式离心机、水
浴锅、研钵、冰和蒸馏水。
四、甘油激酶（GK）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实
验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g）到研钵内，加入 1mL 提取液，
在冰上进行冰浴匀浆或者液氮研磨。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：也可以按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
② 细菌/真菌样本：先收集细菌/真菌到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌/真菌加
入 1mL 提取液；冰浴超声波破碎细菌/真菌（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间
隔 10s，重复 30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：也可按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：澄清的液体样本直接检测，若浑浊则离心后取上清液检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 510nm，蒸馏水调零。
② 在 1mL 的玻璃比色皿（光径 1cm）中依次加入下列试剂：本试剂盒仅供科研使用
2
试剂名称（μL）
测定管
样本
40
试剂一
20
试剂二
40
试剂三
240
试剂四
380
混匀，37℃避光静止 5min。
试剂五
80
混匀，37℃下，立即于 510nm 读取吸光值 A1，室温孵育 5min
后读取 A2。ΔA=A2-A1。
【注】：加完试剂五即启动反应，所以试剂五加完需立即混匀检测，若ΔA 小于 0.05，可增加样本上样
量 V1，试剂四相应减少保持原体系不变（如样本上样量为 80μL 时，试剂四为 340μL）。或延
长反应时间 T（如延长至 10min 或更长），则改变后的 V1 和 T 需带入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线：y =0.1326x - 0.0041：x 为 H2O2标准品浓度(μmoL/mL)，y 为ΔA。
2、按样本鲜重计算：
酶活定义：每克组织每分钟催化生成 1μmoLH2O2 定义为一个酶活单位（U）。
GK(μmoL/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0041)÷0.1326×V1]÷(W×V1÷V)÷T =1.51×(ΔA+0.0041)÷W
3、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟催化生成 1μmoLH2O2 定义为一个酶活单位（U）。
GK(μmoL/min/mg prot)=[(ΔA+0.0041)÷0.1326×V1]÷(V1×Cpr)÷T=1.51×(ΔA+0.0041)÷Cpr
3、按细胞数量计算：
酶活定义：每 104个细胞每分钟催化生成 1μmoLH2O2 定义为一个酶活单位（U）。
GK(μmoL/min/104cell)=[(ΔA+0.0041)÷0.1326×V1]÷(500×V1÷V)÷T=0.003×(ΔA+0.0041)
4、按液体体积计算：
酶活定义：每毫升液体每分钟催化生成 1μmoLH2O2 定义为一个酶活单位（U）。
GK(μmoL/min/mL)=[(ΔA+0.0041)÷0.1326×V1]÷V1÷T=1.51×(ΔA+0.0041)
V－－-加入提取液体积，1 mL；
V1－－-加入样本体积，0.04mL；
T－－-反应时间，5 min；
W－－-样本质量；
500－－-细胞数量；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的蛋白含量测定试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1. 用蒸馏水把母液（250mM）稀释成以下浓度梯度的标准品：0,2,4,6,8,10mM。也可根
据实际情况来调整标准品浓度。
2. 按照测定管（样本替换为标准品）加样体系操作，依据结果即可制作标准曲线。
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