本试剂盒仅供科研使用
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土壤过氧化氢酶(Solid-Catalase,S-CAT)试剂盒说明书
(货号:WS3030F 分光法 48 样)
一、产品简介:
土壤过氧化氢酶主要分解土壤中的过氧化氢,降低土壤中过度累积的过氧化氢对植
物根系的危害。本试剂盒提供一种简单,灵敏,快速的测定方法,即 CAT 催化过氧化
氢产生水与氧气,剩余的过氧化氢与一种高灵敏显色探针反应生成有色物质,其在
510nm 左右有大吸收峰。通过过氧化氢的减少量来计算土壤中 CAT 酶的活力。
本试剂盒突出特点是从紫外波长(240nm:过氧化氢的检测波长)转换到可见波长
(510nm)检测,无需使用石英比色皿或 UV 板。而且由于过氧化氢其不稳定,直接
检测造成读值不稳定,且蛋白质等组分在此紫外波长下也有光吸收,影响结果精确性。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格试剂名称 保存要求
备注
试剂一
液体×1 支
4℃保存
用甩几下或者离心使试剂落入底
部,分别取出 15μL 至四个新的 EP 管
中,再加 1.5mL 蒸馏水充分溶解备用。
试剂二
液体 12mL×1 支
室温
试剂三
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
液体 16mL×1 瓶
4℃保存
标准品
液体 1mL×1 支
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、
蒸馏水。
四、土壤过氧化氢酶(Solid-Catalase,S-CAT)活性测定:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛网,备用。
【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;;土壤过筛,保证取样的均匀细腻;
2、上机检测:
① 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 510nm,蒸馏水调零。
② 试剂一事先按照试剂配制要求配制好,再进行以下操作。
[建议]:若一次性样本较多,离心数量有限,可分批操作,待一批样本加完试剂二开始离心时,再
进行下一批操作(土壤样本可一次性称完,分批按照加样表操作)。
③ 在 EP 管中依次加入:
试剂名称(µL)
测定管
无基质管
无土管
(仅做一次)
土样(g)
0.1
0.1
蒸馏水
800
800
800
室温(25℃)震荡(如:摇床)培养 30min,
试剂一
100
0
100本试剂盒仅供科研使用
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④ 显色反应:在 EP 管中依次加入:
【注】:1. 无土管的颜色深,若测定管颜色很浅接近无色,说明样本里面过氧化氢酶含量很高,则反应
10min 的时间缩短(如 5min)或减少土壤取样质量 W。则改变后的 T 和 W 重新代入公式计算。
2. 若一次性检测样本较多,在显色反应阶段可酌情分批操作和读值,为保证数据的精确性,显色
反应阶段好半个小时内完成。
五、结果计算:
1、标准曲线:y = 0.1677x - 0.0457;x 为标准品摩尔质量(µmol),y 为ΔA。
2、单位定义:每小时每克土样催化 1µmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
S-CAT(µmol/h/g 土样)=[(△A+0.0457)÷0.1677]÷W÷T=35.8×(△A+0.0457)÷W
T---反应时间,10 min=1/6h;
W---土壤样本实际取样量,g。
附:标准曲线制作过程:
1 把标准品(100µmol/mL)稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 20, 40, 60, 80, 100.
µmol/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
2 按照无土管加样顺序(100µL 试剂一换成 100µL 标准品,其他不变)依次加入试剂
测定,标准品的摩尔质量作为横坐标,吸光值作为纵坐标,即得标准曲线。
蒸馏水
0
100
混匀,室温(25℃)10min(务必每隔 2min 摇晃一次)。
试剂二
100
100
100
12000rpm,4℃或室温离心 10min,上清液务必全部转移至新的 EP
管中,待测。
上清液
25
25
25
试剂三
825
825
825
试剂四
150
150
150
室温(25℃)静置 3min,全部转移到 1mL 的玻璃比色皿(光径 1cm)
中,务必立即在 510nm 下读取吸光值 A,△A=A 无土管-(A 测定管-A
无基质管)。