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土壤酸性磷酸酶(S-ACP)试剂盒微板法
价格：￥520
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：96T 原产地：中国大陆 发布时间：2024/7/1 14:24:51更新时间：2024/10/22 9:31:58
产品摘要：土壤磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用，是评价土壤磷素生物转化方向和强度的指标，也与土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 有一定的关系。
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细胞生物学检测
详细内容
本试剂盒仅供科研使用
1
土壤酸性磷酸酶（S-ACP）活性测定试剂盒说明书
(货号：WS4030W 微板法 96 样)
一、产品简介：
土壤磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用，是评价土壤磷素生物转化方向和强度的
指标，也与土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 有一定的关系。
本试剂盒提供一种简单、灵敏、快速的检测方法。在酸性环境中，土壤酸性磷酸酶
（S-ACP）催化磷酸对硝基苯酯（PNPP）生成黄色对硝基苯酚（PNP），该产物在 405nm
处有大吸收峰。通过检测 PNP 在 405nm 下的增加速率，即可得到 S-ACP 酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×2 瓶
4℃保存
每瓶临用加 10mL 试剂一充分溶
解，现配先用，一周内用完。
试剂三
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、蒸馏水、甲苯。
四、土壤酸性磷酸酶（S-ACP）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实
验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
取新鲜土样或干土（风干或者 37 度烘箱风干），先粗研磨，过 40 目筛网备用。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 405 nm。
② 在离心管中依次加入下列试剂：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
空白管
（只做一次）
土样
0.1g 鲜土或
0.05g 干土
0.1g 鲜土或
0.05g 干土
甲苯
10
10
10
试剂一
290
490
290
试剂二
200
200
混匀， 37℃（水浴锅或恒温培养箱）振荡反应 1h
试剂三
300
300
300
混匀，12000rpm 室温离心 10min，取 200μL 上清液至 96 孔板中，
于 405nm 下读取各管吸光值 A，△A=A 测定-A 对照-A 空白（每
个测定管需设一个对照管）。
【注】：1.后一步检测时，若有结晶析出，需要 37℃复溶再读取吸光值。
2.若ΔA 在零附近徘徊，可延长 37℃的孵育时间 T（如增至 4 小时或更长），或增加
土样质量 W（如增至 0.2g）。则改变后的 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
3.若测定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可缩短 37℃的孵育时间 T（如减至 0.5 小时或更短）。本试剂盒仅供科研使用
2
则改变后 T 需代入计算公式重新计算。或对后一步的待检测上清液（包括测定管、对照管
和空白管）同时用蒸馏水进行稀释，稀释倍数 D 代入计算公式。
4.若同时检测一大批同一背景下土壤样本（如都是黄土，黑土，红土，黄土等），可做三次样
本自身对照管（取平均值作为这批土壤样本的对照管），可从称样到检测步骤节省检测时间。
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 0.0149x + 0.0015；x 是 PNP 摩尔质量（nmol），y 是△A。
2、定义：每克土壤每小时水解 PNPP 产生 1nmol 对硝基苯酚（PNP）为一个酶活单位。
S-ACP(nmol/h/g 土样)=[(△A-0.0015)÷0.0149]÷W÷T×D=67.1×(△A-0.0015)÷W×D
D－－-稀释倍数，未稀释即为 1；
W－－-土壤样品质量，g；
T－－-催化反应时间，1h；
PNP 相对分子质量－－-139.11。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（10μmol/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸馏水超声溶解，
若有结晶析出，需 37℃水浴至完全溶解。
2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 1.6, 3.2, 4.8, 6.4, 8 μmol/mL。也可
根据实际样本来调整标准品浓度。
3 在 EP 管中直接加入：10μL 标准品+490μL 试剂一+300μL 试剂三，混匀，取出 200μL
至 96 孔板中，于 405nm 下读取吸光值。
4 根据结果制作标准曲线。
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