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土壤中性磷酸酶(S-NP)试剂盒
价格：￥370
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：48T 原产地：中国大陆 发布时间：2024/7/1 16:48:06更新时间：2024/7/1 16:48:06
产品摘要：土壤磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用，是评价土壤磷素生物转化方向和强度的指标，也与土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 有一定的关系。
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金标层析卡
细胞生物学检测
详细内容
本试剂盒仅供科研使用
1
土壤中性磷酸酶（S-NP）试剂盒说明书
(货号：WS6030F 分光法 48 样)
一、产品简介：
土壤磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用，是评价土壤磷素生物转化方向和强度
的指标，也与土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 有一定的关系。
本试剂盒提供一种简单、灵敏、快速的检测方法。在中性环境中，土壤中性磷酸酶（S-NP）
催化磷酸对硝基苯酯（pNPP）生成黄色的产物 PNP，该产物在 405nm 处有大吸收峰。
通过检测 PNP 在 405nm 下的增加速率，即可得到土壤中性磷酸酶活性的大小。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 55mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
临用加 10mL 试剂一充分溶解，
一周内用完。
试剂三
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、恒温培养箱、分析天平、
可调式移液器、蒸馏水、甲苯。
四、土壤中性磷酸酶（S-NP）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实
验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
取新鲜土样或干土（风干或者 37 度烘箱风干），先粗研磨，过 40 目筛网备用。
2、上机检测：
① 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 405 nm，蒸馏水调零。
② 在离心管中依次加入下列试剂：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
空白管
（只做一次）
土样
0.1g 鲜土或
0.05g 干土
0.1g 鲜土或
0.05g 干土
甲苯
10
10
10
试剂一
290
490
290
试剂二
200
200
混匀， 37℃（水浴锅或恒温培养箱）振荡反应 1h
试剂三
300
300
300
混匀，12000rpm 室温离心 10min，上清液全部转移至 1mL 玻璃
比色皿（光径 1cm）中，于 405nm 下读取各管吸光值 A，△A=A
测定-A 对照-A 空白（每个测定管需设一个对照管）。
【注】：1.后一步检测时，若有结晶析出，需要 37℃复溶再读取吸光值。
2.若ΔA 在零附近徘徊，可延长 37℃的孵育时间 T（如增至 4 小时或更长），或增加
土样质量 W（如增至 0.2g）。则改变后的 T 和 W 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用
2
3.若测定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可缩短 37℃的孵育时间 T（如减至 0.5 小时或更短）。
则改变后 T 需代入计算公式重新计算。或对后一步的待检测上清液（包括测定管、对照管
和空白管）同时用蒸馏水进行稀释，稀释倍数 D 代入计算公式。
4.若同时检测一大批同一背景下土壤样本（如都是黄土，黑土，红土，黄土等），可做三次样
本自身对照管（取平均值作为这批土壤样本的对照管），可从称样到检测步骤节省检测时间。
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 0.0174x + 0.024；x 是 PNP 摩尔质量（nmol），y 是△A。
2、定义：每克土壤每小时水解 PNPP 产生 1nmol 对硝基苯酚（PNP）为一个酶活单位。
S-NP(nmol/h/g 土样)=[(△A-0.024)÷0.0174]÷W÷T×D=57.5×(△A-0.024)÷W×D
W－－-土壤样品质量，g；
D－－-稀释倍数，未稀释即为 1；
T－－-催化反应时间，1h；
PNP 相对分子质量－－-139.11。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（10μmoL/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸馏水超声溶解，
若有结晶析出，需 37℃水浴至完全溶解。
2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 1.6, 3.2, 4.8, 6.4, 8 μmoL/mL。也
可根据实际样本来调整标准品浓度。
3 在 1mL 玻璃比色皿中直接加入：10μL 标准品+490μL 试剂一+300μL 试剂三，405nm
下读取吸光值。
4 根据结果制作标准曲线。
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