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土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶(CBH)试剂盒微板法
价格：￥1820
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：96T 原产地：中国大陆 发布时间：2024/7/1 16:56:23更新时间：2024/12/26 14:28:07
产品摘要：土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶又称土壤纤维二糖水解酶（CBH，EC 3.2.1.91）是土壤纤维素酶系的组份，该酶作用于β-1,4-糖苷键，每次切下一个纤维二糖（还原糖）分子
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
1
土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶（S-CBH）活性测定试剂盒说明书
(货号：WS3230W 微板法 96 样)
一、产品简介：
土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶又称土壤纤维二糖水解酶（CBH，EC 3.2.1.91）是土壤纤维素
酶系的组份，该酶作用于β-1,4-糖苷键，每次切下一个纤维二糖（还原糖）分子，本
试剂盒采用该酶催化对硝基苯基-β-D-纤维二糖苷生成黄色物质对-硝基苯酚（PNP），该物
质在 405nm 有特征光吸收，进而得到土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶（S-CBH）活性大小。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 120mL×1 瓶
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉体 mg×4 支
4℃保存
临用甩几下使粉剂落入底部，
每支再加入 1.4mL 蒸馏水溶解，
4 度保存。
试剂三
液体 40mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、水浴锅或恒温振荡培养箱、可调式移液器、蒸馏水。
四、土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
取新鲜土样或干土（风干或者 37 度烘箱风干），先粗研磨，过 40 目筛网备用。
【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻；
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405nm。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
空白管（仅做一次）
土样（g）
0.1
0.1
试剂一
750
800
750
试剂二
50
50
充分混匀，37℃培养 2 小时（振荡培养或间隔 20min 手动振荡
混匀几下）
试剂三
200
200
200
混匀，8000rpm 离心 5min（若上清液不澄清可加大离心力），取
200μL 上清液至 96 孔板中，405nm 下读取吸光值 A，△A=A 测
定- A 对照-A 空白（每个样本做一个自身对照）。
【注】：1.若ΔA 较小，可延长 37℃的孵育时间 T（如增至 4 小时或更长），或增加土样质
量 W（如增至 0.3g）。则改变后的 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
2.若测定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可缩短 37℃的孵育时间 T（如减至 0.5 小时或更短），
或减少土样质量 W（如减至 0.05g）。则改变后 T 和 W 需代入计算公式重新计算。或对本试剂盒仅供科研使用
2
后一步的待检测上清液（包括测定管、对照管和空白管）同时用蒸馏水进行稀释，稀释倍
数 D 代入计算公式。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.0108x + 0.0053；x 为标准品摩尔质量（nmol），y 为△A。
2、单位定义：每小时每克土样中产生 1nmol 对-硝基苯酚（PNP）定义为一个酶活单位。
S-CBH 活力(nmol/h/g 土样)=(ΔA-0.0053) ÷0.0108÷W÷T×D
=46.3×(ΔA-0.0053)÷W×D
T－－-反应时间，2h；
W－－-土壤样本实际取样量，g；
PNP 相对分子质量－－-139.11。
D－－-稀释倍数，未稀释即为 1。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（10μmol/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸馏水超声溶解。
2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度：0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2μmol/mL。也可根据实际样本
来调整标准品浓度。
3 在 EP 管加入：50μL 标准品+750μL 试剂一+200μL 试剂三，混匀，取 200μL 至 96
孔板中，于 405nm 下读取吸光值，根据结果制作标准曲线。
