本试剂盒仅供科研使用
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土壤β-葡萄糖苷酶(Solid-β-Glucosidase,S-β-GC)试剂盒说明书
(货号:WS2130F 分光法 48 样)
一、产品简介:
土壤β-葡萄糖苷酶(β-GC,EC 3.2.1.21)能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间
的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分,在土壤微生物的糖类代
谢方面具有重要生理功能。
土壤β-葡萄糖苷酶能够催化对-硝基苯-β-D 吡喃葡萄糖苷生成黄色物质对-硝基苯酚
(PNP),该物质在 405nm 有特征光吸收,进而得到土壤β-葡萄糖苷酶的活性。
二、试剂盒的组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
粉剂 mg×1 瓶
-20℃保存
临用加入 9mL 蒸馏水,充分溶解
备用,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂二
液体 40mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 40mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂×1 支
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、恒温振荡培养箱/水浴锅、
可调式移液器、天平。
四、土壤β-葡萄糖苷酶(S-β-GC)酶活检测:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实
验样本和试剂浪费!
1、样本处理:
取新鲜土样或干土(风干或者 37 度烘箱风干),先粗研磨,过 40 目筛网备用。
【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻;
2、测定步骤:
① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 405nm,蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入:
试剂名称(μL)
测定管
对照管
空白管(仅做一次)
土样(g)
0.05
0.05
试剂一
150
150
蒸馏水
150
试剂二
300
300
300
混匀, 37℃振荡反应 1h
试剂三
350
350
350
混匀,12000rpm 室温离心 10min,取全部上清液转移至 1mL 玻璃比
色皿(光径 1cm)中,405nm 下读取吸光值 A,△A=A 测定- A 对照-A
空白(每个样本做一个自身对照)。
【注】:1.若ΔA 在零附近徘徊,可延长 37℃的孵育时间 T(如增至 4 小时或更长),或增加土样质
量 W(如增至 0.2g)。则改变后的 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
2.若测定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5,可缩短 37℃的孵育时间 T(如减至 0.5 小时或更短)。
则改变后 T 需代入计算公式重新计算。或对后一步的待检测上清液(包括测定管、对照管
和空白管)同时用蒸馏水进行稀释,稀释倍数 D 代入计算公式。本试剂盒仅供科研使用
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五、结果计算:
1、标准曲线方程为 y = 0.1461x + 0.0087;x 为标准品质量(μg),y 为△A。
2、单位定义:每小时每克土样中产生 1nmol 对-硝基苯酚(PNP)定义为一个酶活单位。
S-β-GC 活力(nmol/h/g 土样)=(ΔA-0.0087) ÷0.1461÷Mr×103÷W÷T×D
=49.2×(ΔA-0.0087)÷W×D
T---反应时间,1h;
W---实际称取土样质量,g;
Mr--- PNP 相对分子质量,139.11;
D---稀释倍数,未稀释即为 1。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(1mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 mg/mL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 在 EP 管依次加入:20μL 标准品+130μL 蒸馏水+300μL 试剂二+350μL 试剂三,混匀,
全部上清液转移至 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中,于 405nm 下读取吸光值。
4 根据结果制作标准曲线。