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土壤N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(S-NAG)试剂盒微板法
价格：￥1950
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：96T 原产地：中国大陆 发布时间：2024/7/2 14:35:25更新时间：2024/7/2 14:35:25
产品摘要：土壤 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG，EC 3.2.1.52）是溶酶体中的一种酸性水解酶，由土壤微生物分泌，该酶的活性变化与机体某些病理状态密切相关。
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
1
土壤 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（S-NAG）试剂盒说明书
（货号：WS1230W 微板法 96 样）
一、产品简介：
土壤 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG，EC 3.2.1.52）是溶酶体中的一种酸性水解
酶，由土壤微生物分泌，该酶的活性变化与机体某些病理状态密切相关。
土壤 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（S-NAG）分解 4-硝基酚-β-N-乙酰氨基葡萄糖生成
对-硝基苯酚（PNP），在 405nm 处检测该产物的升高速率，来计算 S-NAG 活力大小。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
粉剂 mg×2 瓶
-20℃保存
临用甩几下使粉体落入底部，每瓶
再加 7.6mL 蒸馏水，充分溶解备用，
用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂二
液体 80mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 80mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅或恒温培养箱、可调式移液器、天平。
四、土壤 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（S-NAG）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本的制备：
取新鲜土样或干土（风干或者 37 度烘箱风干），先粗研磨，过 40 目筛网备用。
【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻；
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405nm。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
空白管（仅做一次）
土样（g）
0.05
0.05
试剂一
150
150
蒸馏水
150
试剂二
300
300
300
混匀， 37℃（水浴锅或恒温培养箱）振荡反应 1h
试剂三
350
350
350
混匀，12000rpm，离心 10min，取上清液 200μL 于 96 孔板中，于
405nm 下读取吸光值 A，△A=A 测定-A 对照-A 空白（每个测定管
需设一个对照管）。
【注】：1.若ΔA 在零附近徘徊，可延长 37℃的孵育时间 T（如增至 4 小时或更长），或增加
土样质量 W（如增至 0.2g）。则改变后的 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
2.若测定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可缩短 37℃的孵育时间 T（如减至 0.5 小时或更短）。
则改变后 T 需代入计算公式重新计算。或对后一步的待检测上清液（包括测定管、对照管本试剂盒仅供科研使用
2
和空白管）同时用蒸馏水进行稀释，稀释倍数 D 代入计算公式。
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 0.0959x - 0.0056；x 为标准品质量（μg），y 为吸光值ΔA 。
2、单位定义：每小时每克土样中产生 1nmol 对-硝基苯酚（PNP）定义为一个酶活单位。
S-NAG 活力(nmol/h/g 土样)=(ΔA+0.0056)÷0.0959÷Mr×103÷W÷T×D
=75×(ΔA+0.0056) ÷W×D
T－－-反应时间，1h；
W－－-实际称取土样质量，g；
Mr－－- PNP 相对分子质量，139.11； D－－-稀释倍数，未稀释即为 1。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 在 EP 管中依次加入：20μL 标准品+130μL 蒸馏水+300μL 试剂二+350μL 试剂三，混
匀，取 200μL 至 96 孔板中，于 405nm 下读取吸光值。
4 根据结果制作标准曲线。
