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土壤天冬酰胺酶（S-ASNase）试剂盒
价格：￥670
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：48T 原产地：中国大陆 发布时间：2024/7/2 15:27:57更新时间：2024/11/13 9:36:33
产品摘要：天冬酰胺酶（ASNase，EC 3.5.1.1）是酰胺酶的一种，催化天冬酰胺水解成天冬氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用。
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
1
土壤天冬酰胺酶(solid-asparaginase, S-ASNase) 测定试剂盒说明书
（货号：WS6430F 分光法 48 样）
一、产品简介：
天冬酰胺酶（ASNase，EC 3.5.1.1）是酰胺酶的一种，催化天冬酰胺水解成天冬氨酸
和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用。
土壤中的天冬酰胺酶（S-ASNase）催化天冬酰胺水解成天冬氨酸和氨，利用氨在强碱
的环境下与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液颜色稳定。其在 630nm
处有特征吸收峰，通过检测氨增加的速率，即可计算该酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 40mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×2 瓶
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底
部，每瓶再加 6mL 蒸馏水溶解
备用。
试剂三
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
液体 24mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
液体 12mL×1 瓶
4℃保存
试剂六
A：液体 7mL×4 瓶
B：液体μL×1 支
4℃保存
临用取60μL的B液进一瓶A
液中，混匀后作为试剂六使用。
混匀后的试剂六一周内用完。
标准管
液体 mL×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该标曲。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液枪、水浴锅
或恒温培养箱、甲苯和蒸馏水。
四、土壤天冬酰胺酶（S-ASNase）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本的制备：
取新鲜土样风干或者 37℃烘箱风干，先粗研磨，过 40 目筛网备用。
【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻；
2、上机检测：
① 培养：取 EP 管依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
土样（g）
0.1
0.1
甲苯
20
20
振荡混匀，室温放置 15min
试剂一
200
200
试剂二
100
混匀，放入 37℃水浴锅或恒温培养箱中孵育 2h
试剂三
300
300
试剂二
100
充分混匀，沸水浴（95℃-100℃）10min，室温 12000rpm 离心 10min，本试剂盒仅供科研使用
2
上清液待测。
② 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 630nm，蒸馏水调零。
③ 显色反应：在 EP 管中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
上清液
60
60
蒸馏水
180
180
试剂四
240
240
试剂五
120
120
试剂六
240
240
充分混匀，37℃放置 20min 后，全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿（光
径 1cm）中，于 630nm 处读取吸光值 A，
ΔA=A 测定管-A 对照管（每个样本做一个自身对照）。
【注】1. 试剂四和五和六需分开加，不能事先混匀。
2. 若ΔA 的值较小，可以增加 37℃孵育时间 T（如增至 4 小时或更长），或在显色反应阶段增加上
清液的量 V1(如增至 120μL，则蒸馏水体积相应减少)；则改变后的反应时间 T 和上清液体积
V1 需代入计算公式重新计算。
3. 若 A 测定的值大于 1.8，可以减少 37℃孵育时间 T（如减至 1 小时或更短），或在显色反应阶段
减少上清液的量 V1(如减至 30μL，则蒸馏水体积相应增加)；则改变后的反应时间 T 和上清液
体积 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程为 y = 1.2921x - 0.0071；x 为标准品质量（μg），y 为吸光值ΔA。
2、单位定义：每克土样每小时催化天冬酰胺生成 1μg 氨定义为一个酶活力单位。
S-ASNase(μg/h/g 土样)=(ΔA+0.0071) ÷1.2921×(V÷V1)÷W÷T
=4×(ΔA+0.0071) ÷W
V－－-反应体系总体积，0.62mL；
V1－－-显色反应阶段上清液体积，0.06mL；
T－－-反应时间，2h；
W－－-土样质量；
附：标准曲线制作过程：
1 标准品母液（10μg/mL 的氨）：
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 2, 4, 6, 8, 10 μg/mL。也可根据实际样本来
调整标准品浓度。
3 按照显色反应阶段的测定管加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。
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