本试剂盒仅供科研使用
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土壤α-木糖苷酶(Solid-β- xylosidase)测定试剂盒说明书
(货号:WS3330F 分光法 24 样)
一、产品简介:
α-木糖苷酶(EC 3.2.1.177)是一类木聚糖降解水解酶,存在于微生物等生物体,促使非
还原末端α-D-木糖残基的水解,释放出α-D-木糖。
土壤中α-木糖苷酶催化对硝基苯酚-α-D-木糖苷产生对硝基苯酚(PNP),该产物在
405nm 处有特征吸收峰,通过测定 405nm 光吸收增加速率,即可计算土壤α-木糖苷酶活
性。
二、试剂盒组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用甩几下使试剂落入底部,
再加 2mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
液体 15mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液 33mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂×1 支
4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、可调式移液器、天平、低温离心
机、蒸馏水。
四、土壤α-木糖苷酶活性测定:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本的制备:
取新鲜土样风干或者 37℃烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛网备用。
【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻;
2、上机检测:
① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 405nm,蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入:
试剂名称
测定管
对照管
风干土样(g)
0.2
0.2
试剂一(μL)
75
蒸馏水
75
试剂二(μL)
165
165
混匀, 40℃振荡反应 30min
试剂三(μL)
660
660
混匀,12000rpm,离心 10min,取全部上清液转移至 1mL 玻璃比色皿中,405nm
下读取吸光值 A,△A= A 测定- A 对照(每个样本需做一个自身对照)。
【注】:1.若ΔA 过小,可以增加土样量或延长保温时间(如:60min 或更长),重新调整的
样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。
2.若 A 测定超过 1.5,可以减少土样量或降低保温时间(如:10min),重新调整的
样本量 W 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用
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五、结果计算:
1、标准曲线方程:y=0.1215x+0.0036;x 为标准品质量(μg),y 为吸光值ΔA。
2、单位定义:每小时每克土样中产生 1μg 对-硝基苯酚(PNP)定义为一个酶活力单位。
土壤α-木糖苷酶活性(μg/h/g 土样)=(ΔA-0.0036) ÷0.1215÷W÷T
=16.5×(ΔA+0.0058)÷W
T----反应时间,30min=0.5h;
W---实际称取干土质量,g;
PNP 相对分子质量---139.11。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(1mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 在 EP 管加入:60μL 标准品+15μL 蒸馏水+165μL 试剂二+660μL 试剂三,混匀,取
全部上清液转移至 1mL 玻璃比色皿中,于 405nm 下读取吸光值。
4 根据结果制作标准曲线。