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土壤芳基酰胺酶活性测定试剂盒
价格：￥770
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：24T 原产地：中国大陆 发布时间：2024/7/2 16:05:09更新时间：2024/11/22 9:19:52
产品摘要：土壤芳基酰胺酶（Aryl-acylamidase，EC 3.5.1.13）可水解带有酰胺基团的化合物；本试剂盒利用土壤芳基酰胺酶水解底物 L-亮氨酸β-萘胺生成β-萘胺，β-萘胺接着与对二甲氨基肉桂醛生成红色偶氮化合物，该化合物于 540nm 处有特征吸收峰，通过检测该红色物质的增加速率，即可计算土壤芳基酰胺酶活性大小。
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金标试纸条
金标渗滤卡
金标层析卡
细胞生物学检测
详细内容
本试剂盒仅供科研使用
1
土壤芳基酰胺酶活性测定试剂盒说明书
（货号：WS4430F 分光法 24 样）
一、产品简介：
土壤芳基酰胺酶（Aryl-acylamidase，EC 3.5.1.13）可水解带有酰胺基团的化合物；本
试剂盒利用土壤芳基酰胺酶水解底物 L-亮氨酸β-萘胺生成β-萘胺，β-萘胺接着与对二甲
氨基肉桂醛生成红色偶氮化合物，该化合物于 540nm 处有特征吸收峰，通过检测该红色
物质的增加速率，即可计算土壤芳基酰胺酶活性大小。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
临用甩几下使试剂落入底部，再
加入 6mL 蒸馏水，充分溶解备用，
试剂三
液体 14mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
临用甩几下使试剂落入底部，再
加入 15mL 乙醇，充分溶解备用。
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、天平、离心机、恒温水浴锅、乙醇、
可调式移液器。
四、土壤芳基酰胺酶活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样本情况，熟悉实验流程，避免实
验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
取新鲜土样风干或者 30℃烘箱风干，先粗研磨，过 40 目筛，备用。
【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻；
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
0.1g 土壤
0.1g 土壤
试剂一
300
300
试剂二
100
混匀，于 37℃孵育 2h（间隔 30min 振荡混匀一次）
95%乙醇
600
600
试剂二
100
立即混匀，于 12000rpm，室温或 4℃离心 10min，离心 10min，
上清液待测。本试剂盒仅供科研使用
2
③ 显色反应，在 EP 管中依次加入：
上清液
280
280
试剂三
280
280
试剂四
280
280
混匀，10min 后，全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿（光径
1cm）中，于 540nm 处测定吸光值 A，
△A=A 测定-A 对照（每个样本做一个自身对照）。
【注】：1.若△A 值在零附近徘徊，可在 37℃孵育阶段延长反应时间 T(如增至 3h 或更长)，或增
加土壤样本量 W（如增至 0.2g），则改变后的反应时间 T 和 W 需代入公式重新计算。
2. 若 A 测定的值大于 1.8，可用乙醇对整个红色显色反应液进行稀释，则稀释倍数 D
需代入公式参与计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.0546x - 0.016，x 是标准品浓度（μg/mL）, y 是△A。
2、酶活定义：37℃条件下，每克土样每小时释放出 1μg 的β-萘胺为一个酶活力单位。
土壤芳基酰胺酶活性(μg/h/g 土样)=(△A+0.016)÷0.0546×V1÷W÷T
=9.2×(△A+0.016)÷W
V1－－-孵育阶段的反应总体积，1mL；
T－－-反应时间，2h；
W－－-样本质量，g；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（2.5mg/mL）：标准品用 1mL 乙醇溶解。（母液需在两天内用）。
2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 5, 10, 15, 20, 25. μg/mL。也可根
据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据显色反应阶段测定管的加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。
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