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土壤焦磷酸酶(S-PPase)试剂盒微板法
价格：￥1500
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：96T 原产地：中国大陆 发布时间：2024/7/2 17:22:55更新时间：2024/12/26 14:28:07
产品摘要：土壤焦磷酸酶（焦磷酸盐磷酸水解酶，EC 3.6.1.1）催化焦磷酸盐水解成正磷酸盐。在土壤有机磷的矿化和转化中发挥重要作用。
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细胞生物学检测
详细内容
本试剂盒仅供科研使用
1
土壤焦磷酸酶活性测定试剂盒说明书
(货号：WS9330W 微板法 96 样)
一、产品简介：
土壤焦磷酸酶（焦磷酸盐磷酸水解酶，EC 3.6.1.1）催化焦磷酸盐水解成正磷酸盐。在
土壤有机磷的矿化和转化中发挥重要作用。
本试剂盒提供一种简单、灵敏、快速的的检测方法。土壤焦磷酸酶催化焦磷酸盐水解
成磷酸盐。可通过在 700nm 处测定生成的无机磷量来确定该酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制：
【注】：全程操作需无磷环境；试剂配置好用新的枪头和玻璃移液器等，也可以用一次性塑料器皿，
避免磷污染。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、蒸馏水。
四、土壤焦磷酸酶活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实
验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
取新鲜土样或者 37 度烘箱风干（需先粗研磨），过 40 目筛网备用。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30 min，调节波长到 700 nm。
② 反应 mix 制备：试剂四和五按照要求加蒸馏水溶解后，按试剂三：四：五=10:2:5
的比例依次混合配置（需现配现用，若出现蓝色则需弃掉重新配置）。
③ 在离心管中依次加入下列试剂：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
土壤样本（g）
0.1
0.1
试剂一
370
370
试剂二
30
混匀，37℃振荡培养 2h（间隔 30min 振荡混匀一次）
试剂三
200
200
试剂二
30
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 80mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
用甩几下使试剂落入底部，再
加 6.4mL 蒸馏水，混匀溶解备用。
试剂三
液体 65mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
粉体 mg×1 支
4℃保存
临用甩几下使试剂落入底部，再
加 4.2mL 蒸馏水，混匀溶解备用。
试剂五
粉体 mg×7 支
4℃保存
临用甩几下使试剂落入底部，每
支再加 1.5mL 蒸馏水，混匀溶解
备用，现配现用。
标准品
粉体 1 mL×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂本试剂盒仅供科研使用
2
立即混匀，于 12000rpm，室温或 4℃离心 5min，上
清液需立即测定，不可久置。
④ 显色反应，在 96 孔板中依次加入：
上清液
50
50
反应 mix
150
150
混匀，室温静置 15min，于 700nm 处读取吸光值 A，
△A=A 测定-A 对照（参看注意事项）。
【注】：1. 若△A 的值在零附近，可延长孵育时间 T（如增至 5h）。
2. 若是同时检测同一背景下的土壤样本（如同一批样本不同时间点的取样），
此批土壤样本可做一个批次的样本自身对照，节省时间。
五、结果计算：
1、标准曲线：y=0.5987x - 0.0003；x 是标准品摩尔浓度（μmol/mL）， y 是△A。
2、活性定义：在 37℃，每克土壤每小时水解 1μmol 焦磷酸产生 1μmol 无机磷定义为 1 个
酶活单位。
土壤焦磷酸酶(μmol/h/g 土样)=(△A+0.0003)÷0.5987×V1÷W÷T
=0.5×(△A+0.0003)÷W
V1－－-孵育阶段整个反应体积：600μL=0.6mL；
W－－-土壤样品质量，g；
T－－-催化反应时间，2 h；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（5μmoL/mL）：标准品用 10mL 蒸馏水溶解。（母液需在两天内用）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0，0.2，0.4，0.6，0.8，1. μmol/mL。也可根
据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据显色反应阶段测定管的加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。
