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土壤磷酸二酯酶(S-PDE)试剂盒微板法

价格:¥920

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号:96T 原产地:中国大陆 发布时间:2024/7/3 14:07:56更新时间:2024/12/26 14:28:07

产品摘要:土壤磷酸二酯酶(S-PDE,EC 3.1.4.1)是在土壤磷酸单酯酶之后的的第二大磷酸酶。其在土壤有机磷的循环代谢中起到重要作用。

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详细内容

 
本试剂盒仅供科研使用
1
土壤磷酸二酯酶(S-PDE)活性测定试剂盒说明书
(货号:WS0430W 微板法 96 )
一、产品简介:
土壤磷酸二酯酶(S-PDEEC 3.1.4.1)是在土壤磷酸单酯酶之后的的第二大磷酸酶。
其在土壤有机磷的循环代谢中起到重要作用。
本试剂盒提供一种简单、灵敏、快速的的检测方法。土壤磷酸二酯酶(S-PDE)催化
(4-硝基苯)磷酸酯 (BNPP)生成黄色的产物 PNP,该产物在 405nm 处有大吸收峰。
通过检测 PNP 405nm 下的增加速率,即可得到 S-PDE 酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 120mL×1
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×6
4℃保存
临用每支甩几下或离心使粉剂落入
底部,每支再加 4mL 蒸馏水充分溶解,
现配先用,两天内用完
试剂三
液体 80mL×1
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅或恒温培养箱、天平、可调式移液器。
四、土壤磷酸二酯酶(S-PDE)活性测定:
1、样本制备:
取新鲜土样或干土(风干或者 37 度烘箱风干),先粗研磨,过 40 目筛网备用。
2、上机检测
① 酶标仪预热 30 min,调节波长到 405 nm
② 在离心管中依次加入下列试剂:
试剂名称(μL
测定管
对照管
土样
0.1g 鲜土或 0.05g 干土
0.1g 鲜土或 0.05g 干土
试剂一
500
500
试剂二
100
37℃(水浴锅或恒温培养箱)振荡反应 1 h
试剂三
400
400
试剂二
100
混匀,12000rpm 室温离心 5min立即取上清液 200μL 96 孔板中,
405nm 下读取吸光值 AA= A 测定- A 对照(参考注意事项)。
【注】:1.A 测定超过 1.5,可对后一步的待检测上清液(测定管和对照管)同时进行稀释(用水稀释即
可),稀释倍数 D 代入计算公式;
2.ΔA 在零附近徘徊,可延长 37的孵育时间 T(如增至 4 小时或更长),或增加土样质量 W(如
增至 0.2g)。则改变后的 T W 需代入计算公式重新计算。
3.若同时检测同一背景下的土壤样本,此批土壤样本可做做三次样本自身对照管(取平均值作为
这批土壤样本的对照管),节省时间;若是不同背景下的土壤样本(如黑土,红土,黄土等),
则每个样本需做一个自身对照,即按照说明书加样表操作即可,本试剂盒仅供科研使用
2
五、结果计算:
1、标准曲线:y = 0.0127x - 0.01x PNP 摩尔质量(nmol), y A
2、活性定义:在 37℃,每克土壤每小时水解 BNPP 产生 1nmol PNP 定义为 1 个酶活单位。
S-PDE(nmol/h/g 土样)=[(A+0.01)÷0.0127]÷W÷T×D=78.74×(A+0.01)÷W×D
W---土壤样品质量,g
D---稀释倍数,未稀释即为 1
T---催化反应时间,1 h
PNP 相对分子质量---139.11
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(10μmol/mL):向标准品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸馏水超声溶解,
若有结晶析出,需 37℃水浴至完全溶解。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 2, 4, 6, 8, 10 μmol/mL。也可根据实际样本
来调整标准品浓度。
3 EP 管中直接加入:10μL 标准品+590μL 试剂一+400μL 试剂三,混匀,立即取上
清液 200μL 96 孔板中,立即于 405nm 下读取吸光值 A
4 根据结果制作标准曲线。

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