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硝酸还原酶(NR)试剂盒微板法
价格：￥880
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：96T 原产地：中国大陆 发布时间：2024/7/3 15:33:20更新时间：2024/11/7 14:33:00
产品摘要：硝酸还原酶（NR，EC 1.7.1.3）广泛存在于植物中，是一种诱导酶。是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶，与作物有效吸收和利用氮素肥料有关，是植物营养或农田施肥的指标，也可作为品种选育的指标。
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
1
硝酸还原酶（Nitrate Reductase，NR）活性测定试剂盒说明书
（货号：WS2040W 微板法 96 样）
一、产品简介：
硝酸还原酶（NR，EC 1.7.1.3）广泛存在于植物中，是一种诱导酶。是植物硝态氮转
化为氨态氮的关键酶，与作物有效吸收和利用氮素肥料有关，是植物营养或农田施肥的
指标，也可作为品种选育的指标。
本试剂盒采用离体法检测，通过硝酸还原酶催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐进
一步与磺胺及α-萘胺定量生成紫红色偶氮化合物；颜色深浅与硝酸还原酶活性呈正比，
通过检测该物质于 530nm 的吸光值，即可得出硝酸还原酶的活性。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 120mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
用甩几下使试剂落入试管底部，再加 10mL
提取液溶解，仍 4℃保存。
试剂二
粉剂 mg×4 支
-20℃保存
用甩几下或离心使粉剂落入底部，每支分别
加 1mL 蒸馏水溶解，用不完的试剂分装后-20℃
保存，禁止反复冻融，三天内用完。
试剂三
粉剂 mg×2 瓶
4℃保存
用甩几下使试剂落入底部，每瓶再加 6mL 蒸
馏水，于 70℃水浴约半小时至完全溶解备用。
试剂四
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
使用需超声至完全溶解。
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、研钵、冰和蒸馏水。
四、硝酸还原酶（NR）活性测定：
由于硝酸还原酶是个诱导酶，酶活性大小与取样是否诱导有关（施过氮肥、光照充足
条件下所取植物样本即为诱导处理样本），因此务必取 2 个样本做预测定，依据预测定结果选
择是否进行诱导处理。
酶的诱导（选做）：取适量新鲜样本洗净，放入盛有 1mg/mL 硝酸钾溶液（自备）的
烧杯中（淹没即可），浸泡 2h，取出样本用滤纸吸干后，-20℃冷冻 30min，取出样本再
用滤纸吸干后即可按照样本制备步骤制备待测上清液。
1、样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆(难磨样本可用石英砂
研磨，不能用液氮研磨)。12000rpm，4℃离心 10min，取上清液，置冰上待测。
【注意】提取过程操作应迅速，并且在 4℃下进行。若样本颜色较深（如植物叶片），可在样本制备过
程中增加除色素步骤：取约 0.2g 组织（水分充足的样本可取 1g），加入 1mL 的 80%乙醇冰浴匀浆，
12000rpm，4℃离心 10min，弃掉色素较深的上清液；以上除色素步骤重复 2 次。后向离心得到的
沉淀中加入 1mL 提取液，混匀或再次冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
超声波破碎细菌或细胞（冰浴，300W，超声 3s，间隔 7s，总时间 3min）；12000rpm，
4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 530nm。
② 反应 mix 的制备：已完全溶解的试剂三和试剂四按照 1:1 的比例混合（每次可根据本试剂盒仅供科研使用
2
检测样本数量现用现配），试剂三和四完全溶解后于 4℃存放一段时间会有沉淀析
出，每次配置反应 mix 需重新完全溶解。
③ 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
20
20
试剂一
70
试剂二
30
蒸馏水
100
30℃（如水浴锅或恒温培养箱）避光培养 30min
反应 mix
100
100
混匀，30℃避光反应 15min，立即于 530nm 处读取吸光值 A，
△A=A 测定-A 对照（每个样本需做一个自身对照）。
【注】：1.若△A 值低于 0.005，可增加样本加样体积 V1（如增至 50μL，则试剂一相应减少），
则改变后的 V1 需代入公式重新计算。
2. 若整个反应结束后有沉淀浑浊现象，可在 EP 管中重新按照上表加入相应试剂量，加完反
应 mix 于 30℃避光反应 15min 后，室温 12000rpm 离心 3min，取等体积的上清液至 96
孔板中读值。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.7244x-0.0002；x 为标准品摩尔浓度（μmol/mL），y 为△A。
2、按样本鲜重计算：
单位定义：每小时每克鲜重样品中催化产生 1nmol NO2ˉ的量为一个 NR 活力单位。
NR(nmol/h/g 鲜重)=[(△A+0.0002)÷0.7244×103×V1]÷(W×V1÷V)÷T=2761×(△A+0.0002)÷W
3、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每小时每毫克组织蛋白催化产生 1nmol NO2ˉ的量为一个 NR 活力单位。
NR(nmol/h/mg prot)=[(△A+0.0002)÷0.7244×103×V1]÷(V1×Cpr)÷T=2761×(△A+0.0002)÷Cpr
4、按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每小时每百万细菌或细胞催化产生 1nmol NO2ˉ的量为一个 NR 活力单位。
NR(nmol/h/104 cell)=[(△A+0.0002)÷0.7244×103×V1]÷(500×V1÷V)÷T=5.52×(△A+0.0002)
V－－-加入提取液体积，1mL；
V1－－-加入样本体积：0.02mL；
T－－-反应时间，30min=0.5h；
W－－-样本鲜重，g；
500－－-细胞数量，百万；
标准品亚硝酸钠的分子量－－-69；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1
制备标准品母液：用 1mL 的蒸馏水溶解，再用蒸馏水稀释 200 倍即为 0.5μmol/mL，现配现用。（母
液需在两天内用且-20℃保存）。
2
把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.1,0.2,0.3,0.4, 0.5μmol/mL。也可根据实际样本来调整标
准品浓度。
3
按照测定管的加样步骤操作，根据结果即可制作标准曲线。
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