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NADH-谷氨酸合成酶(NADH-GOGAT)试剂盒-非绿色组织
价格：￥540
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：48T 原产地：中国大陆 发布时间：2024/7/3 15:42:42更新时间：2024/12/26 14:28:07
产品摘要：谷氨酸合成酶（GOGAT)广泛分布于植物中，植物吸收的无机氮经硝酸还原糖（NR）和亚硝酸还原酶（NIR）还原成 NH4+后，通过谷氨酰胺合成酶（GOGAT）参与的 GS/GOGAT 途径才能进行氮素的同化和利用。GOGAT 一般包含两类：一类是多存在于叶绿体（叶片）中的 Fd-GOGAT，另一类是多存在于非绿色组织（根）质体中的 NADH-GOGAT。
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金标渗滤卡
金标层析卡
细胞生物学检测
详细内容
本试剂盒仅供科研使用
1
NADH-谷氨酸合成酶（Glutamate synthase, NADH-GOGAT）试剂盒说明书
（货号：WS3040F 紫外分光法 48 样）
一、产品简介：
谷氨酸合成酶（GOGAT)广泛分布于植物中，植物吸收的无机氮经硝酸还原糖（NR）和亚硝酸还原酶
（NIR）还原成 NH4+后，通过谷氨酰胺合成酶（GOGAT）参与的 GS/GOGAT 途径才能进行氮素的同化和
利用。GOGAT 一般包含两类：一类是多存在于叶绿体（叶片）中的 Fd-GOGAT，另一类是多存在于非绿
色组织（根）质体中的 NADH-GOGAT。
NADH-谷氨酸合成酶（NADH-GOGAT，EC 1.4.1.14) 催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸，形成两
分子的谷氨酸；同时 NADH 氧化生成 NAD+，可以通过检测 340nm 吸光度的下降速率得出 NADH-GOGAT
的酶活性大小。
该酶催化的反应：L-glutamine + 2-oxoglutarate + NADH + H+=2 L-glutamate + NAD+
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×2 支
4℃保存
用甩几下或 4℃离心使试剂落入试
管底部，每瓶加入 4.2mL 的提取液充
分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保
存，禁止反复冻融，三天内用完。
试剂二
粉剂 mg×2 瓶
4℃保存
用甩几下或 4℃离心使试剂落入试
管底部，每瓶加入 14mL 的提取液充分
溶解，仍 4℃保存。
三、所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、台式离心机、水浴锅、可调式移液
器、研钵、冰和蒸馏水。
四、NADH-GOGAT 酶活性检测：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、粗酶液提取：
称取约 0.1g 组织（水分多的样本取 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，
4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。若样本
颜色较深（如植物叶片），可引起起始值 A1 值较大如超过 1.5，可在样本制备过程中增加除色素步
骤：取约 0.2g 组织（水分充足的样本可取 1g），加入 80%乙醇冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，
弃掉色素较深的上清液；以上除色素步骤重复 2 次。后向离心得到的沉淀中加入 1mL 提取液，
混匀或再次冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2、测定步骤：
① 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
② 在 1mL 石英比色皿（光径 1cm）中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
样本
80
试剂一
160
试剂二
560本试剂盒仅供科研使用
2
混匀，于 340nm 下检测，1min 时读取 A1，10min 后读取 A2 值，
ΔA=A1-A2。
【注】1.若 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会偏高），可以
适当减少样本加样量 V1（如减至 40μL，另外 40μL 用提取液补齐），则改变后的 V1 需代入计
算公式重新计算。或者减少试剂一的加样量（如减至 80μL，另外 80μL 用蒸馏水补齐）
或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 后 12000rpm, 4℃离心 10min，上清液用于检测；
2. 若ΔA 的值大于 0.4，则需减少反应时间（如减少至 5min），则改变后的反应时间 T 需代入计
算公式重新计算。
3. 若下降趋势不稳定，可以每隔 20S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来参与计算，
相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
NADH-GOGAT(nmol Glu/min/mg prot）=2×[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr) ÷T
=3215.4 ×ΔA÷Cpr ÷T
2、按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
NADH-GOGAT（nmol Glu/min/g 鲜重）=2×[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V) ÷T
=3215.4×ΔA÷W÷T
V－－提取液体积，1 mL；
V1－－加入样本体积，0.08mL；
V2－－反应总体积，8×10-4 L；
ε－－NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；
d－－1mL 石英比色皿光径，1cm；
W－－样本质量，g；
T－－反应时间，本实验中是 10min，若线性区间的时间改变则以实际检测时间代入公式计算；
2－－每合成 2nmol 的 Glu 有 1nmol 的 NADH 被氧化；
Cpr－－样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司 BCA 蛋白含量测定试剂盒。
