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NADPH-谷氨酸脱氢酶(NADPH-GDH)试剂盒-酵母菌
价格：￥670
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：48T 原产地：中国大陆 发布时间：2024/7/3 16:15:30更新时间：2024/7/3 16:15:30
产品摘要：谷氨酸脱氢酶广泛分布于生物体中，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。其辅酶是 NADPH 或 NADH，在动植物种两种辅酶都有存在，在酵母中主要是 NADPH-谷氨酸脱氢酶（EC 1.4.1.4）。
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抗体
Axygen耗材
细胞
金标试纸条
金标渗滤卡
金标层析卡
细胞生物学检测
详细内容
本试剂盒仅供科研使用
1
NADPH-谷氨酸脱氢酶（NADPH-GDH）试剂盒说明书
（货号：WS6040F 分光法 48 样）
一、产品简介：
谷氨酸脱氢酶广泛分布于生物体中，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作
用。其辅酶是 NADPH 或 NADH，在动植物种两种辅酶都有存在，在酵母中主要是 NADPH
-谷氨酸脱氢酶（EC 1.4.1.4）。
本试剂盒提供一种快速灵敏的检测方法，样品中的 NADPH-谷氨酸脱氢酶特异性作用于
底物谷氨酸并产生 NADPH，同时与显色剂反应生成黄色物质，该物质在 450nm 处有大吸
收峰，进而得到 NADPH-GDH 的酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体70mL×1瓶
4℃保存
试剂一
液体10mL×1瓶
4℃保存
浓度为1M
试剂二
液体5mL×1瓶
4℃保存
试剂三
液体2.2mL×1支
4℃保存
标准品
粉剂mg×1支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
注：粉剂量在 mg 别，使用用手甩几次或者进行离心，打开直接加入要求的试剂即可。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、
研钵、冰和蒸馏水。
四、NADPH-谷氨酸脱氢酶（NADPH-GDH）活性测定：
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 10min，取上
清，置冰上待测。（或按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取）
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。（或按照细菌或细胞数量（104 个）：
提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取）
③ 液体样本：直接检测。
2、上机检测：
①可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。
② 在 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
提取液
320
试剂一
200
试剂二
80
样本
160
试剂三
40
混匀，立即 450nm 下读取 A1 值，15min
后读取 A2 值。ΔA=A 2-A1。本试剂盒仅供科研使用
2
【注】：若ΔA 值过小，可以延长反应时间 T（如由 15min 增至 30min 或 1 小时），
或增加加样体积 V1（如由 160μL 增至 320μL，则提取液相应减少），则改
变后的 T 和 V1 需要代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线的方程：y = 0.0304x + 0.008，x 是 NADPH 摩尔质量（nmol），y 是ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
NADPH-GDH(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.008)÷0.0304]÷(V1×Cpr) ÷T
=13.71×(ΔA-0.008)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织每分钟生成 1 nmolNADPH 定义为一个酶活力单位。
NADPH-GDH(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA-0.008)÷0.0304]÷(W×V1÷V) ÷T
=13.71×(ΔA-0.008)÷W
4、按细菌/细胞密度计算：
单位定义：每 1 万个细菌/细胞每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
NADPH-GDH(nmol/min/104 cell)=[(ΔA-0.008)÷0.0304]÷(500×V1÷V) ÷T
=0.028×(ΔA-0.008)
5、液体中 NADPH-GDH 活力计算：
单位定义：每毫升液体每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
NADPH-GDH(nmol/min/mL)=[(ΔA-0.008)÷0.0304]÷V1÷T=13.71×(ΔA-0.008)
V－－-加入提取液体积，1 mL；V1－－-加入样本体积，0.16mL； T－－-反应时间，15min；
W－－-样本质量，g；
500－－-细菌或细胞总数，500 万；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（0.5nmol/μL）：向标准品 EP 管里面加入 1.2ml 蒸馏水（母液需在
两天内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5.nmol/μL。也可根据实
际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
