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谷氨酰胺酶(GLS)试剂盒微板法
价格：￥1030
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：96T 原产地：中国大陆 发布时间：2024/7/3 16:20:44更新时间：2024/10/29 14:43:27
产品摘要：谷氨酰胺酶（GLS，EC 3.5.1.2）是酰胺酶的一种，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
1
谷氨酰胺酶(glutaminase, GLS) 活性测定试剂盒说明书
(货号：WS7040W 微板法 96 样)
一、产品简介：
谷氨酰胺酶（GLS，EC 3.5.1.2）是酰胺酶的一种，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，
在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
谷氨酰胺酶（GLS）催化谷氨酰胺水解成 L-谷氨酸和氨，利用氨在强碱的环境下与次
氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液颜色稳定。其在 630nm 处有特征吸收
峰，通过检测氨增加的速率，即可计算该酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×2 瓶
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部，每瓶再加 11mL
蒸馏水溶解备用。
试剂三
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
液体 12mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
液体 6mL×1 瓶
4℃保存
试剂六
A：液体 3.5mL×4 瓶
B：液体μL×1 支
4℃保存
临用取 30μL 的 B 液进一瓶 A 液中，混匀后作
为试剂六使用。混匀后的试剂六一周内用完。
标准管
液体 mL×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该标曲。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
四、谷氨酰胺酶（GLS）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实
验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织（水分足的样本可取 0.2-0.5g），加入 1mL 提取液；进行
冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：也可以按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细
胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，
重复 30 次）；12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 630nm。
② 所有试剂解冻至室温（25℃），在 EP 管依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
40
40
试剂一
100
100
试剂二
100
试剂三
100
混匀，放入 37℃水浴锅或恒温培养箱中孵育 1h本试剂盒仅供科研使用
2
试剂二
100
试剂三
100
混匀，室温 12000rpm 离心 10min，上清液待测。
③ 显色反应：在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
上清液（上步反应）
30
30
蒸馏水
30
30
试剂四
60
60
试剂五
30
30
试剂六
60
60
充分混匀，37℃放置 20min 后，于 630nm 处读取吸光值 A，
ΔA=A 测定管-A 对照管（每个样本做一个自身对照）。
【注】1. 试剂四和五和六需分开加，不能事先混匀。
2. 若ΔA 的值较小，可增加 37℃孵育时间（如增至 2 小时或更长），或在显色阶段增加上清液量
V1(如增至 60μL，则蒸馏水体积相应减少)；则改变后的 T 和 V1 需代入计算公式重新计算。
3. 若 A 测定大于 1.5，可减少 37℃孵育时间（如减至 0.5 小时或更短），或在显色阶段减少上清
液量 V1(如减至 15μL，则蒸馏水体积相应增加)；则改变后的 T 和 V1 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程为 y = 3.229x - 0.0118；x 为标准品质量（μg），y 为吸光值ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成 1μg 氨定义为一个酶活力单位。
GLS(μg/h/mg prot)=(ΔA+0.0118)÷3.229×(V2÷V3)÷(V1×Cpr)÷T=87.75×(ΔA+0.0118)÷Cpr
3、按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织每小时催化谷氨酰胺生成 1μg 氨定义为一个酶活力单位。
GLS(μg/h/g 鲜重)=(ΔA+0.0118)÷3.229×(V2÷V3)÷(W×V1÷V)÷T=87.75×(ΔA+0.0118)÷W
4、按细胞数量计算：
单位定义：每 104个细胞每小时催化谷氨酰胺生成 1μg 氨定义为一个酶活力单位。
GLS(μg/h/104 cell)=(ΔA+0.0118)÷3.229×(V2÷V3)÷(500×V1÷V)÷T=0.18×(ΔA+0.0118)
5、按照液体体积计算：
单位定义：每毫升液体每小时催化谷氨酰胺生成 1μg 氨定义为一个酶活力单位。
GLS(μg/h/mL)=(ΔA+0.0118)÷3.229×(V2÷V3)÷V1÷T=87.75×(ΔA+0.0118)
V－－-提取液体积，1mL；
V1－－-加入②歩反应体系中样本体积，0.04mL；
V2－－-②歩反应体系总体积：0.34mL；
V3－－-③歩显色步骤中上清液体积，0.03mL；
T－－-反应时间，1h；
W－－-样本质量；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 标准品母液（10μg/mL 氨），把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 2, 4, 6, 8, 10 μg/mL。
2 按照显色反应阶段的测定管加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。
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