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碱性蛋白酶(AKPT)试剂盒
价格：￥620
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：24T 原产地：中国大陆 发布时间：2024/7/3 16:30:51更新时间：2024/9/3 10:33:30
产品摘要：脲酶（UE；EC 3.5.1.5）是一种含镍的寡聚酶，特异性地催化尿素水解释放出氨和二氧化碳。脲酶活性与有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关，反应了氮素状况
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
1
脲酶（Urease，UE）测定试剂盒说明书
(货号：WS2140F 分光法 24 样)
一、产品简介：
脲酶（UE；EC 3.5.1.5）是一种含镍的寡聚酶，特异性地催化尿素水解释放出氨和二氧化碳。脲酶活性
与有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关，反应了氮素状况。
本试剂盒利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的 NH3-N，其在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚反
应，生成水溶性染料靛酚蓝，其深浅与溶液中的 NH3-N 含量呈正比，该物质在 578nm 有大光吸收，其
深浅与溶液中的 NH3-N 含量呈正比，进而得出脲酶活力大小。
二、测试盒组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60 mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 g×1 瓶
4℃保存
用甩几下或 4℃离心使试剂落入试管底部，再加
入 3mL 蒸馏水，充分溶解，用不完的试剂 4℃保存。
试剂三
液体 13mL×1 瓶
4℃保存
避光保存。
试剂四
液体 7mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
A：液体 7mL×2 瓶
B：液体μL×1 支
4℃保存
临用取 60μL 的 B 液进一瓶 A 液中，混匀后作为
试剂五使用。混匀后的试剂五一周内用完。
标准品
液体 1 mL×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅、离心机、可调式移液器、研钵。
四、脲酶（UE）活性测定：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、 样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，冰浴
匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，取上清液待用。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或
细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔
10s，重复 30 次）；12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、 上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 578nm，蒸馏水调零。
② 在 EP 管依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本上清液
20
20
试剂一
190
190
试剂二
90
蒸馏水
90
混匀，放入 40℃水浴锅或恒温培养箱中孵育 1h
③ 显色反应：在 EP 管中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
2
试剂名称（μL）
测定管
对照管
②步反应混合液
60
60
蒸馏水
180
180
试剂三
240
240
试剂四
120
120
试剂五
240
240
充分混匀，37℃放置 20min 后，全部液体转移至 1mL 玻璃比
色皿（光径 1cm）中，于 578nm 处读取吸光值 A，
ΔA=A 测定管-A 对照管（每个样本做一个自身对照）。
【注】1. 试剂三和四和五需分开加，不能事先混合。
2. 若ΔA 值较小，可增加取样质量 W（如 0.2g 或更多）或在②步中增加样本加样体积 V1（如增至
50μL，则试剂一相应减少），或在③步显色反应阶段增加上清液量 V2(如增至 100μL，则蒸馏水
体积相应减少)；则改变后的 W 和 V1 和 V2 需代入计算公式重新计算。
3. 若 A 测定值大于 1.8，可在③步阶段减少上清液量 V2(如减至 30μL，则蒸馏水体积相应增加)；
或用蒸馏水稀释③步检测用到的上清液，则改变后的 V2 和稀释倍数 D 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程为 y=1.0438x - 0.0015；x 为标准品质量（μg），y 为吸光值ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟产生 1μg 的 NH3-N 定义为一个酶活力单位。
脲酶(UE)(μg/min/mg prot)=[(ΔA+0.0015)÷1.0438]×(V3÷V2)÷(V1×Cpr)÷T×D
=4×(ΔA+0.0015)÷Cpr×D
3、按样本鲜重计算：
酶活定义：每克组织每分钟产生 1μg 的 NH3-N 定义为一个酶活力单位。
脲酶(UE)(μg/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0015)÷1.0438]×(V3÷V2)÷(W×V1÷V)÷T×D
=4×(ΔA+0.0015)÷W×D
4、按细胞数量计算：
酶活定义：每 104个细胞每分钟产生 1μg 的 NH3-N 定义为一个酶活力单位。
脲酶(UE) (μg/min/104 cell)=[(ΔA+0.0015)÷1.0438]×(V3÷V2)÷(500×V1÷V)÷T×D
=0.008×(ΔA+0.0015)×D
5、按液体体积计算:
酶活定义：每毫升液体每分钟产生 1μg 的 NH3-N 定义为一个酶活力单位。
脲酶(UE)(μg/min/mL)=[(ΔA+0.0015)÷1.0438]×(V3÷V2)÷V1÷T×D=4×(ΔA+0.0015)×D
V－－-提取液体积，1mL；
V1－－-②步反应体系中样本加样体积，0.02mL；
V2－－-③步显色阶段上清液体积，0.06mL； V3－－-②步反应总体积，0.3mL；
T－－-反应时间，60min；W－－-样本质量，g； 500－－-细胞数量； D－－-稀释倍数，未稀释即为 1；
Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1. 把标准品母液（1mg/mL），用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0,2,4,6,8,10. μg/mL。也可根据
实际样本来调整标准品浓度。
2. 在③步显色反应阶段，按照测定管加样表操作，依据结果即可制作标准曲线。
热门标签：碱性蛋白酶(AKPT)试剂盒
