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天冬酰胺合成酶（ASNS)试剂盒微板法
价格：￥1150
品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号：96T 原产地：中国大陆 发布时间：2024/7/3 16:45:12更新时间：2024/12/26 14:28:07
产品摘要：天冬酰胺合成酶（AS，EC 6.3.5.4) 广泛存在于植物和微生物体内，是一个以氨或谷氨酰胺及天冬氨酸为底物催化合成天冬酰胺的关键酶，该酶对于研究植物营养有重要意义
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金标层析卡
细胞生物学检测
详细内容
本试剂盒仅供科研使用
1
天冬酰胺合成酶（Asparagine Synthetase，AS）试剂盒说明书
（货号：WS9340W 微板法 96 样）
一、产品简介：
天冬酰胺合成酶（AS，EC 6.3.5.4) 广泛存在于植物和微生物体内，是一个以氨或谷氨酰
胺及天冬氨酸为底物催化合成天冬酰胺的关键酶，该酶对于研究植物营养有重要意义，
天冬酰胺合成酶（AS) 催化谷氨酰胺的氨基转移到天冬氨酸形成天冬酰胺，同时生成谷氨
酸；利用谷氨酸脱氢酶作用于生成的谷氨酸，同时使 NAD+还原成 NADH，通过测定 NADH
在 340nm 处的增加速率，进而得出天冬酰胺合成酶活性大小。
该酶催化反应：ATP+L-aspartate+L-glutamine+H2O=AMP+diphosphate+L-asparagine+L-glutamate。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部，再
加入 12mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
粉体 mg×1 瓶
-20℃保存
临用甩几下使粉体落入底部，再
加入 12mL 蒸馏水溶解备用。
试剂三
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部，再
加入 12mL 蒸馏水溶解备用。
试剂四
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用甩几下使粉体落入底部，再
加入 6mL 蒸馏水溶解备用。
试剂五
液体 50mL×1 瓶
4℃保存
试剂六
液体 4mL×1 瓶
4℃保存
试剂七
粉体 mg×1 支
-20℃保存
临用甩几下使粉体落入底部，再
加入 2.2mL 蒸馏水溶解备用。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、天冬酰胺合成酶（AS）活性检测：
建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
称取约 0.1g 组织（水分多的样本取 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，
4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
100
100
试剂一
50
50
试剂二
50
50
试剂三
50
50本试剂盒仅供科研使用
2
试剂四
50
试剂五
100
150
混匀，37℃下孵育 20 分钟
95℃沸水浴 3 分钟，上下混匀后，12000rpm 离心 5 分钟，
上清液待测。
③ 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
②歩上清液
80
80
试剂五
90
90
试剂六
20
20
试剂七
10
10
混匀，37℃下孵育 30 分钟，于 340nm 处读吸光值 A，
△A=A 测定-A 对照（每个样本需设一个自身对照 ）。
【注】若△A 差值在零附近，可在③反应阶段增加上清液（V3）的量（如增加到 120-150μL，
则试剂五相应减少）；或延长第②歩中 37℃反应时间 T（如由 20min 增加至 40min）；
或增加②歩中样本加样体积 V1（如由 100μL 增至 200μL，则试剂五相应减少）；则改
变后的 V3 或 T 或 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmoL 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
AS(nmol NADH/min/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V4×109]×(V2÷V3)÷(V1×Cpr) ÷T
=160.8×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
单位定义：每克组织每分钟生成 1nmoL 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
AS(nmol NADH /min/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V4×109]×(V2÷V3)÷(W×V1÷V) ÷T
=160.8×ΔA÷W
V－－-加入提取液体积，1 mL；
V1－－-②步中加入样本体积，0.1mL；
V2－－-②步反应体系总体积，4×10-4 L；
V3－－-③反应阶段中上清液，0.8×10-4 L；
V4－－-③步反应体系总体积，2×10-4 L；
d－－-96 孔板光径，0.5cm；
ε－－-NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L/moL/cm；
W－－-样本质量，g；
T－－-反应时间，20min；
Cpr－－-蛋白浓度（mg/mL），建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。
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