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ELISA试剂盒洗涤的正确方法你知道吗?

点击次数：12582 发布时间：2022/11/15 10:27:04

ELISA靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。恒远生物为大家总结ELISA试剂盒洗涤的两大方法。

一、浸泡式

1.吸干或甩干孔内反应液；

2.用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后，即甩去)；

3.浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置1-2分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；

4.吸干孔内液体。可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干；

5.重复操作c和d，洗涤3-4次(或按说明规定)。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。

二、流水冲洗式

初用于小珠载体的洗涤，洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置，使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗，持续冲洗 2分钟后，吸干液体，再用蒸馏水浸泡2分钟，吸干即可。浸泡式犹如盆浴，流水冲洗式则好比淋浴，且也简便、快速。已有实验表明，流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压，让水流冲击板孔表面，洗涤效果更佳。

除了洗涤方式，还有主洗涤参数、洗涤次数等在实验中也是至关重要的，关于洗涤实验的优化方面，我司技术也给大家分析分析：

ELISA试剂盒洗涤参数：

洗涤量

自动洗板机会分配洗涤液。如果你之遭遇过高背景，那么不要犹豫，将洗涤量调为高，比包被体积更高。太少的洗涤液会让一部分分析表面洗涤不到，从而明显增加背景。所有反应孔的洗涤量必须相同。ELISA板的制造商通常会在试剂盒的使用手册中列出包被量。行业中通常使用的包被量是200μl。如果你的试剂盒也是这样，那么制造商可能会建议使用300μl洗涤液进行洗涤，以便清洁整个反应孔的壁。一般来说，洗涤量越高，则孵育步骤残留的抗体或抗原量就越少。

洗涤循环的量

【ELISA试剂盒洗涤】次数越多，背景越低。然而，太多次的洗涤会降低信号强度，使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过，ELISA板的制造商会对洗涤次数提出建议。一般而言，制造商包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的ELISA板，必须优化洗涤次数。

控制洗涤量和洗涤次数的另一种方法是加入过量的洗涤液。一般来说，96孔板的每个孔能容纳330至460ul。不过，有些自动化洗板机可设置程序，分配远远超出这个量的洗涤液，比如1ml。它是如何做到的呢？其实很简单，就是在分液的同时打开吸液功能。换句话说，随着分液器分配更多的液体，抽吸器也将液体吸出。这种技术能增加洗涤量，但不会溢出到其他孔中。

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原创作者：上海恒远生物科技有限公司

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