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免疫学三大工具:IHC、ELISA和WB区别
点击次数：12533 发布时间：2023/2/7 10:56:04
在科研实验技术方面，恒远生物为了帮助初学者快速上手，减少摸索苦恼，门为大家准备了一套标准的实验流程和技巧。检测实验样本，ELISA、WB、IHC选哪个？看完这篇你就知道了。
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IHC：
IHC免疫组化抗原技术是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。
ELISA（酶联免疫吸附试验）：
ELISA用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。
Western bolt:
是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。可以用于定性和半定量。WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
1.对于IHC来说，定位是免疫组化的优势
该方法可在组织和细胞中进行抗原的准确定位, 因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定位较直接准确、定性灵敏度高，是定位检测分析方法对病理学域开展深入研究是十分有意义，尤其对于有些因子的转位研究十分有用。
2.WB与IHC技术相比，定量可能更加准确
当然WB也可定性和定位（通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反映它们的定位），但敏感性远远低于IHC。
3.ELISA与IHC相比，定量准确，是分泌性蛋白检测方法
尤其对于微定量分析多个样本非常有用，所用试剂和样品量很少，结果准确。IHC针对性比较强，而且一般是以组织或者细胞为样本，而ELISA一般是使用血清或者组织磨碎液。免疫组化可以快速检测样本中抗体的阳性或者阴性，一般不用于定量检测。
4.WB和ELISA的区别
WB：可以看到特异性的条带，但是定量比较烦
ELISA：可以直接读出浓度，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可信。
WB：只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点elisa做不到
ELISA：可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响
WB：所检测的一般是抗原，而elisa抗原抗体都可以检测。
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原创作者：上海恒远生物科技有限公司
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