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检测细胞凋亡的三种常用方法,您知道几种?
点击次数：12822 发布时间：2019/10/25 8:43:17
人体内的细胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性的，有些死亡则是病理性的，有关细胞死亡过程的研究，已成为生物学、医学研究的一个热点，身为一位科研工作者，对细胞凋亡的几种检测方法都应该有所了解！今天上海恒远为大家整理了相关内容，希望能够帮到大家。
一、形态学观察方法
1.HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。
2.丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：医学教/育网搜集整理活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
3.台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。
4.透射电镜观察：可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。
二、DNA凝胶电泳
1.检测原理
细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均发生断裂，细胞内小分子量DNA的片断增加，高分子DNA减少，胞质内出现DNA的片断。但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180－200bpDNA的片断，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并可与坏死细胞区别。
2.结果判断
正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状（LADDER）条带；坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带。
三、酶联免疫吸附法（ELISA）核小体测定
凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA的片断组成，可由ELISA法检测。
1.检测步骤
1.1.将凋亡细胞裂解后高速离心，其上清液中含有核小体；
1.2.在微定量板上吸附组蛋白体；
1.3.加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合；
1.4.加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合；
1.5.加酶的底物，测光吸收制。
2、用途
该法敏感性高，可检测5*100/ml凋亡细胞。可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。该法不需要特殊仪器，适合基层工作，但是不能测定凋亡细胞发生的绝多对量。
原创作者：上海恒远生物科技有限公司
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