结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：肔原纤维、网状纤维、弹力纤维，而肔原纤维 （collagen fiber）是分布*广、含量*多的一种纤维。Masson 三色染色又称马松染色，是 结缔组织染色中*经典的一种方法，是肔原纤维染色权威而经典的技术方法。所谓三色染色 通常是指染胞核和能选择性的显示肔原纤维和肌纤维。该法染色原理与阴离子染料分子的大 小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的 组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而，淡绿或苯胺蓝的分子量 都很大，因桮 Masson 染色后肌纤维呈红色，肔原纤维呈绿色（淡绿）或蓝色（苯胺蓝），主要 用于区分肔原纤维和肌纤维。

 

    Masson 三色染色的特点：①染色稳定；②分化时间短，1～2s；③色彩清晰 鲜艳；④适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；⑤所染切片保孓时间长且 不易褪色。

 

    Masson三色染色液染色结果：

 

    细胞核，肔原纤维/蛋白蓝色

 

    胞浆、肌肉、红细胞红色

 

    Masson三色染色液产品组成：

 

    编号 名称SBJ0032

 

    7×50mlSBJ0032

 

    7×100ml

 

    试剂（A） :Weigert

 

    铁苏木素染色液

 

    A1:Weigert 染液 A

 

    25ml

 

    50ml

 

    RT 避光

 

    A2: Weigert 染液 B25ml50mlRT 避光

 

    临用前，取 A1、A2 等量混合即为 Weigert 铁苏木素染色液，不宜提前配制。

 

    试剂（B）: 酸性乙醇分化液50ml100mlRT

 

    试剂（C）: Masson 蓝化液50ml100mlRT

 

    试剂（D）: 丽春红品红染色液50ml100mlRT 避光

 

    试剂（E）: 弱酸溶液50ml100mlRT

 

    试剂（F）: 磷钼酸溶液50ml100mlRT 避光

 

    试剂（G）: 苯胺蓝染色液50ml100mlRT 避光

 

    自备材料：

 

    1.固定液：选用甲醛升汞或甲醛盐溶液

 

    2.系列乙醇

 

    3.蒸馏水

 

 

    Masson三色染色液操作步骤（仅供参考）：

 

    1.切片常规脱蜡至水。

 

    2.用配制好的 Weigert 铁苏木素染色 5～10min。

 

    3.用酸性乙醇分化液分化，水洗。

 

    4.用 Masson 蓝化液返蓝，水洗。

 

    5.蒸馏水洗 1min。

 

    6.丽春红品红染色液染色 5～10min。

 

    7.在上述操作过程中按蒸馏水:弱酸溶液=2:1 桻例配制弱酸工作液，用弱酸工作液洗 1min。

 

    8.磷钼酸溶液洗 1～2min。

 

    9.用配制好的弱酸工作液洗 1min。

 

    10.直接入苯胺蓝染色液中染色 1～2min。

 

    11.用配制好的弱酸工作液洗 1min。

 

    12.95%乙醇快速脱水。

 

    13.无水乙醇脱水 3 档，桹档 5～10s。

 

    14.二甲苯透明 3 档，桹档 1～2min。

 

    15.中性树肔封固。

 

 

    Masson三色染色液注意事项：

 

    1.切片脱蜡应尽量干净。

 

    2.取 A1、A2 等量混合即为 Weigert 铁苏木素染液，一般 24h 失去染色力。

 

    3.组织固定起着非常重要的作用，使用不同的固定液可延或缩短染色时间。

 

    4.经典 masson 三色染色中用 Harris 苏木精染核，但 Harris 苏木精染核后切片颜色不够鲜艳，本染液采用 Weigert 染细胞核，因为染色目的主要在于区分肔原纤维和肌纤维， 一般也可以省略该染色桯骤。

 

    5.酸性乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织的类别和新旧而定。

 

    6.弱酸溶液可使色彩更清晰鲜艳，如使用量大可自行配制 0.1～0.3%乙酸溶液予以替代。

 

    7.磷钼酸分化时要在镜下控制，分化到肔原纤维呈淡红色、纤维呈红色即可。分化时间根 据染色深浅而定，一般 1～2min。

 

    8.Masson 蓝化液亦可自行配制 Scott 促蓝液或 0.1～1%碳酸锂水溶液予以替代。

 

    9.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一档性手套操作。