我公司为感谢朋友们长期以来的支持与厚爱，特选在双十一前为咱们*共享：elisa试剂盒试验的阅历。以下是我公司技术人员总结出的小阅历供咱们参考：

    包被原的性质很重要

    这关系到做出的抗体可不能够被其识别，所以保存抗原很重要，做重组蛋白时，要在冰浴下缓慢融化。还有有的包被原或许不是蛋白，关于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被。

    1、亲和素生物素：先亲和素先包被载体，参加生物素化的DNA，这种包被方法均匀、健壮，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。

    2、脂类物质：可将其在有机溶剂中溶解后参加ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或凉风吹干，待酒精蒸腾后，让脂质天然干固在固相表面。

    3、小分子必须依靠和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。

    包被液的挑选

    一般挑选ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需求，包被原的特殊性也或许采用中性的缓冲溶液来包。应留意：

    由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，ELISA试剂盒靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附对错特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。具体的试验还要有稳固的理论外也要实践，看一下zui终可不能够应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。

    封闭

    继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的进程。封闭便是让许多不相关的蛋白质充填这些空隙，然后架空ELISA后的过程中烦扰物质的再吸附。
常用封闭剂有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明胶；脱脂奶粉，比较价廉，能够高浓度使用（5%－10％）；ELISA试剂盒还有一些稀有用到的各种动物血清和酪蛋白等等。但zui终选用什么，要依据试验具体来实践。

    洗刷板

    能够说在ELISA操作中，洗刷是zui首要的关键技术。由于聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，为到达别离游离的和结合的酶标记物的意图，铲除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的烦扰物质，在洗刷时又应把这种非特异性吸附的烦扰物质洗刷下来。所以在洗板时会有必定差错，人为因素很大（当然有条件的用洗板机在外），洗的不完全或串了孔，对如此活络的ELISA系统但是不小的影响。

    加抗体标本(和二抗)

    留意该换枪头时换枪头。标本稀释一般可用pbs稀释，也可用封闭液去稀释。如需加二抗，还要留意二抗的作业浓度，太高糟ta，太低则着色浅。

    显色

    我们一开始做的时分，要挑选适合的显色系统。留意显色系统酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵，AP结合物可加叠氮钠。每次做尽量要把阴阳空三个对照做好，如出现问题也好剖析。

原创作者：上海恒远生物科技有限公司