轻松掌握细胞凋亡检测实验的方法_技术文章

当前位置：易推广>上海恒远生物科技有限公司>技术文章>轻松掌握细胞凋亡检测实验的方法

企业档案

会员类型：体验版会员

已获得易推广信誉等级评定

41成长值

(0 -40)基础信誉积累，可浏览访问

(41-90)良好信誉积累，可接洽商谈

(91+ )优质信誉积累，可持续信赖

易推广体验版会员：14年

工商认证【已认证】

最后认证时间：

注册号：**** 【已认证】

法人代表：【已认证】

企业类型：经销商【已认证】

注册资金：人民币***万【已认证】

产品数：14639

参观次数：7718146

手机网站：http://m.yituig.com/c58469/

旗舰版地址：http://www.hybiosh.com

技术文章

轻松掌握细胞凋亡检测实验的方法

点击次数：12125 发布时间：2024/1/19 9:47:02

细胞凋亡是一种细胞主动有序的死亡，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等作用，它并不是病理条件下自体损伤的一种现象，而是为了更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡。本期恒远生物给大家介绍细胞凋亡检测实验的方法，一起来学习下吧！

一、PI 单染色法

1. 收集细胞｛数目约（1~ 5）×106 个/mL｝，500 ~ 1000 r/min 离心 5min，弃去培养液。

2. 3ml PBS 洗涤 1 次。

3. 离心去 PBS，加入冰预冷的 70%的乙醇固定，4℃，1—2 小时。

4. 离心弃去固定液，3mlPBS 重悬 5min。

5. 400 目的筛网过滤 1 次，500—1000r/min 离心 5min，弃去 PBS。

6. 用 1ml PI 染液染色，4℃避光 30min。

7. 流式细胞仪检测：PI 用氩离子激发荧光，激光光波波长为 488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光分析 PI 荧光强度的直方图也可分析散射光对侧散射光的散点图。

8. 结果判断：在散射光对侧散射光的散点图或地形图上，凋亡细胞与正常细胞相比，散射光降低，而侧散射光可高可低，与细胞的类型有关；在分析 PI 荧光的直方图时，先用门技术排除成双或聚集的细胞以及发微弱荧光的细胞碎片，在 PI 荧光的直方图上，凋亡细胞在G1/G0 期出现一亚二倍体峰。如以 G1/G0 期所在位置的荧光强度为 1.0，则一个典型的凋亡细胞样本其亚二倍体峰的荧光强度为 0.45，可用鸡和鲑鱼的红细胞的 PI 荧光强度做参照标准，两者分别为 0.35 和 0.7，可以确保在两者之间的不是细胞碎片而是完整的细胞。

注意事项：

细胞凋亡时，其 DNA 可染性降低被认为是凋亡细胞的标志，但这种 DNA 可染性降低也可能是因为 DNA 含量的降低，或者是因为 DNA 结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。

二、Annexin V/PI 双染色法

1. 细胞收集：悬浮细胞直接收集到 10ml 的离心管中，每样本细胞数为（1~5）×106，/mL 500~1000r/min 离心 5min，弃去培养液。

2. 用孵育缓冲液洗涤 1 次，500~1000r/min 离心 5min。

3. 用 100ul 的标记溶液重悬细胞，室温下避光孵育 10~15min。

4. 500~1000r/min 离心 5min 沉淀细胞孵育缓冲液洗 1 次。

5. 加入荧光（SA-FLOUS）溶液 4℃下孵育 20min，避光并不时振动。

6. 流式细胞仪分析：流式细胞仪激发光波长用 488nm，用一波长为 515nm 的通带滤器检测 FITC 荧光，另一波长大于 560nm 的滤器检测 PI。

7. 结果判断：凋亡细胞对所有用于细胞活性鉴定的染料如 PI 有抗染性，坏死细胞则不能。

总结：细胞膜有损伤的细胞的 DNA 可被 PI 着染产生红色荧光，而细胞膜保持完好的细胞则不会有红色荧光产生。因此，在细胞凋亡的早期 PI 不会着染而没有红色荧光信号。正常活细胞与此相似。在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，为（FITC-/PI-）；右上象限是非活细胞，即坏死细胞，为（FITC+/PI+）；而右下象限为凋亡细胞，显现（FITC+/PI- ）

三、Heochst 33342/PI 双染色法

1. 悬浮生长的细胞在培养的状态下加入 Heochst 33342 ，终浓度为 1ug/ml； 37℃孵育7—10min。

2. 低温 500 ~ 1000r/min 离心 5min 弃去染液。

3. 加入 1.0ml PI 染液，4℃避光染色 15min。

4. 400 目的筛网过滤 1 次。

5. 流式细胞仪分析：Heochst 33342 用氪激光激发的紫外线荧光，激发光波波长为352nm，发射光波波长为 400 ~ 500nm，产生兰色荧光；PI 用氩离子激光激发荧光，激发光波波长为 488nm，发射光波波长大于 630nm，产生红色荧光。分析兰色荧光对红色荧光的散点图或地形图。

6. 结果判断：在兰色荧光对红色荧光的散点图上，结果为：正常细胞为低蓝光/低红光，凋亡细胞为高蓝光/低红光，坏死细胞为低蓝光/高红光。

注意事项：

① 在红色荧光对兰色荧光散点图上，还可见到细胞凋亡区向细胞坏死区迁移的轨迹，可能是凋亡细胞的 DNA 进一步降解的缘故。

② 用 Heochst 33342 染料与细胞孵育的时间不宜过长，一般控制在 20min 之内为宜。如果太长可引起 Heochst 33342 的发射光谱由蓝光向红光的迁移，导致红色荧光与兰色荧光的比例改变，从而影响结果的判断。

更多实验资讯可咨询我司业务员。上海恒远生物科技有限公司拥有自己的实验室，备有业的技术研发团队，于各种生物试剂，细胞，血清，ELISA试剂盒的研发与销售，实验提供免费代测服务，并提供精湛的技术服务，如果您有实验上的问题欢迎来咨询，为您提供业的一对一技术指导。

原创作者：上海恒远生物科技有限公司

轻松掌握细胞凋亡检测实验的方法

产品展示

企业档案

已获得易推广信誉等级评定

ELISA试剂盒

酶联免疫试剂盒

人ELISA试剂盒

进口血清

抗体

标准品

Sigma试剂

Amresco试剂

食品检测试剂盒

Spectrum试剂

免疫化学产品

其他方法测试盒

金标试剂盒

放免试剂盒

代理品牌

代理品牌

技术文章

轻松掌握细胞凋亡检测实验的方法

相关信息

相关产品

企业档案

已获得易推广信誉 等级评定

技术文章

轻松掌握细胞凋亡检测实验的方法

相关信息

相关产品

已获得易推广信誉等级评定