近期有客户向我们咨询胎牛血清细胞培养中黑点如何防止生成？对此我司技术专员给出了详细了解释，为防止客户由于操作方面而使黑点生成的办法。因此定要做好以下几点。方可使细胞培养顺利。

1.尽可能地减少血清冻融次数。

2.培养基无需37℃水浴。

3.培养基保持zuiPH 值7.0-7.2。

4.严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。

5.掌握细胞传代的zui时机，细胞切勿生长过老。

 一、化冻 

将血清从-20 度冰箱中取出，室温（或浸于自来水中）化冻（约需要30分钟至2小时，也可放于4度冰箱化冻过夜；化冻后若不马上灭活，可以放入4度冰箱中暂时保存）

二、灭活

1.放入室温的水浴锅内开始加热（同时放入一个空的血清瓶，内装100ml自来水，插入一根温度计，温度监控以此为准）

2.当温度计显示56度时，停止加热，改为间断加热，维持56度（±0.5度）30分钟（±3分钟；若不小心使温度上升超过56度，则：若仍未超过60度，且时间很短，比如不超过5分钟，则仍可使用；若超过60度，或者时间较长，则弃去不用，或者尝试用于一些普通细胞的培养）

3.取出，自然冷却至室温（约需1-3小时），可分装或-20度继续冻存。

三、分装

1.转入无菌间，在超净台内将血清分装入10ml离心管中（注意预先要将血清轻轻摇动数周、混匀；用吸液管或吹大管吹出血清时要注意：不要吹出气泡（血清很粘稠，很容易产生气泡；如果产生气泡， 则在酒精灯火焰上过一下）。

2.放入-20 度冰箱冻存。

3.全部操作约需要4-6小时。

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