资料简介：
徐立新１＊ ，严丽军１，２
（１．南通市第三人民医院肝病科，江苏 南通 ２２６０００；２．南京医科大学临床医学院，江苏 南京 ２２６０００）

摘要：目的 研究白桦脂酸（Ｂｅｔｕｌｉｎｉｃａｃｉｄ）对四氯化碳（ＣＣｌ４）诱导的小鼠肝损伤的保护作用及其相关机制。方法 ５０ 只ＩＣＲ小鼠随机分为５组：空白对照组、ＣＣｌ４ 组、ＣＣｌ４ ＋水飞蓟素组（２００ｍｇ／ｋｇ）、ＣＣｌ４ ＋白桦脂酸低剂量组（２０ｍｇ／ｋｇ）、ＣＣｌ４ ＋白桦脂酸高剂量组（４０ｍｇ／ｋｇ）。除空白对照组和 ＣＣｌ４ 组给予等体积蒸馏水外，其余各组每日灌胃给予相应剂量药物，共７ｄ。末次给药２ｈ后，腹腔注射０．１％ 的 ＣＣｌ４ 植物油溶液（１０ｍＬ／ｋｇ），空白对照组腹腔注射等体积植物油。１８ｈ 后取血、肝脏。各组小鼠肝脏做 ＨＥ 染色，检测血清丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、白介素（ＩＬ－６、ＩＬ－１β）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ?α）水平，
并采用蛋白免疫印记法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）检测肝脏组织中ｐ－ＮＦ?κＢ、ＮＦ?κＢ、ｐ－ＩκＢα、ＩκＢα、Ｎｒｆ－２ 和 ＨＯ－１ 蛋白表达。结果 白桦
脂酸（２０、４０ｍｇ／ｋｇ）能降低 ＣＣｌ４ 诱导的肝损伤小鼠血清 ＭＤＡ、ＩＬ－６、ＩＬ－１β和 ＴＮＦ?α含量（Ｐ ＜０．０１），升高 ＳＯＤ 含量（Ｐ ＜ ０．０１）；能显著改善小鼠肝脏组织的病理学改变；显著降低肝脏ｐ－ＮＦ?κＢ、ｐ－ＩκＢα蛋白表达（Ｐ ＜０．０１），增加肝脏 Ｎｒｆ－２ 和 ＨＯ－１蛋白表达（Ｐ＜０．０５～０．０１）。结论 白桦脂酸对 ＣＣｌ４ 诱导的小鼠肝损伤具有保护作用，这种效应可能与 Ｎｒｆ－２／ＨＯ－１／ＮＦ?κＢ信号通路有关。
肝脏是人体*重要的实质性器官，它具有强大的代谢和防御功能。当各种外源化学物质或者自身代谢产生的废弃物蓄积到肝脏时，可能会引起肝损伤、肝炎、肝纤维化甚至肝细胞坏死等疾病。这些化学性物质包括四氯化碳（ＣＣｌ４）、酒精、对乙酰氨基酚类感冒药等［１］。因此，肝脏疾病已成为影响人类健康的常见病。目前对于肝脏疾病的治疗主要集中于立即停止服用可能造成肝损伤的药物并采用抗炎、抗自由基损伤、保护肝细胞膜、促进肝细胞代谢、促进肝细胞修复和再生、促进胆红素及胆汁酸代谢的药物进行治疗［２］。传统中医药药物资源丰富，许多中草药对于肝脏具有一定的保护作用，采用中医药治疗肝损伤也逐渐为国内外学者所重视。
化学性肝损伤动物模型有 ＣＣｌ４、Ｄ －氨基半乳糖胺和醋氨酚等，其中 ＣＣｌ４是*经典的急性肝损伤模
型，重复性好且技术简单。ＣＣｌ４ 是一种可以迅速被肝脏吸收的细胞毒性物质，它在肝脏内会诱发自由基形成从而导致链式过氧化反应［３］。同时，ＣＣｌ 还会引起细胞内环境紊乱，激活大量炎症因子，从而进一步产生氧自由基，加重肝损伤。因此，本实验采用ＣＣｌ４复制肝损伤小鼠模型。
    采用０．５％ＣＭＣ－Ｎａ混悬，白桦脂酸高剂量浓度为４ｍｇ／ｍＬ，白桦脂酸低剂量浓度为２ｍｇ／ ｍＬ；水飞蓟素（纯度：９７％）购自天津万象恒远科技有限公司，采用 ０．５％ＣＭＣ－Ｎａ 混悬；ＣＣｌ４ （纯 度： ９９．５％）购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。
１．２ 动物
５０只雄性ＩＣＲ 小鼠（２０～２２ｇ）由南通大学实验动物中心提供。许可证号：ＳＣＸＫ（苏）２０１２－０００１。 １．３ 试剂
ＭＤＡ、ＳＯＤ 试剂盒购自南京建成生物工程研究所；ＩＬ－１β、ＩＬ－６ 和 ＴＮＦ?α 酶联免疫试剂盒由 Ｅｌａｂｓｃｉｅｎｃｅ公司提供（批号：Ｅｘ２１０７０７）；ｐ－ＮＦ?κＢ、
ＮＦ?κＢ、ｐ－ＩκＢα、ＩκＢα、Ｎｒｆ－２、ＨＯ－１ 和 ＧＡＰＤＨ 抗体均由 ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ （Ｄａｎｖｅｒｓ，ＵＳＡ）公司提供。
１．４ 仪器
台式高 速 微 量 离 心 机 （美 国 ＳＣＩＬＯＧＥＸ 公司）；６８０型酶联免疫检测仪（上海众生声明科学发展有限公司）；ＤＹＣ 系列电泳仪（北京市六一仪器厂）；Ｔａｎｏｎ５２００曝光仪（上海天能科技有限公司）。 １．５ 实验方法
１．５．１ 分组与给药 将５０ 只雄性ＩＣＲ 小鼠随机分为５ 组，每组１０ 只：空白对照组（Ｃ）、ＣＣｌ４ 组（Ｍ）、
ＣＣｌ ＋水飞蓟素组（２００ｍ ／ｋ ）（Ｐ）、ＣＣｌ ＋白桦脂

４ ｇ ｇ ４

研究表明，白桦脂酸可以提高机体免疫应答［６］、抑制

酸低剂量组（２０ ｍ ／ｋ ）（Ｌ）、ＣＣｌ ＋ 白桦脂酸高剂

ｇ ｇ ４

胰脂肪酶［７］、预防脑缺血再灌注损伤［８］、治疗高血糖症［９］、缓 解酒精性肝损伤［１０］。 然而，白 桦脂酸对 ＣＣｌ４ 诱导的急性肝损伤的研究甚少。因此，本实验拟探讨白桦脂酸对 ＣＣｌ４ 诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。
炎症是一种机体对有害刺激所产生的以防御为主的病理反应，氧化应激是体内氧化与抗氧化系统失衡，是自由基在体内产生的负面作用，会引起中性粒细胞浸润、分泌大量蛋白酶、产生氧化中间产物等。炎症与氧化应激相辅相成，是导致机体衰老和疾病的重要因素。本研究通过检测血清内炎症因子和丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）含量；以及炎症和氧化应激相关蛋白ｐ－ＮＦ?κＢ、ｐ－ＩκＢα 和 Ｎｒｆ－２、ＨＯ－１ 在肝脏组织内的表达，探讨白桦脂酸对 ＣＣｌ４诱导的小鼠急性肝损伤的相关机制。
１ 材料和方法
１．１ 试验药物
.....................想要阅读文献全文，欢迎下载