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“恒远生物”产品文献：Ｒ( + ) 普拉克索对急性脑缺血大鼠脑损伤的保护作用
点击次数： 413发布时间：2011/3/7
- 上 传 者： 上海恒远生物科技有限公司
- 上传时间： 2019/4/16 8:45:28
- 文件大小： 235KB
- 文件类型： pdf
- 所属分类： 应用方法
- 下载次数： 36次
- 查看次数： 413
资料简介：
郭淑娟1 ，王琮民2
( 1． 邯郸市中心医院 老年病科，河北 邯郸 056001; 2． 河北工程大学附属医院 神经内科，河北 邯郸 056001)
均出现脑梗死( P ＜ 0． 05) 。再灌注 8 h 时，Ｒ + PPX + MCAO 组样本的脑梗死体积明显小于 MCAO 组( P ＜ 0． 05) ，但再灌注 24 h 时，MCAO、Ｒ + PPX + MCAO 两组的脑梗死体积无明显差异。( 3) 再灌注 8 h 时，Ｒ + PPX + MCAO 组的
ＲOS 阳性细胞数明显少于 MCAO 组( P ＜ 0． 05) ，但再灌注 24 h 时，这两组的 ＲOS 阳性细胞数差异无显著性意义。
结论 Ｒ + PPX 干预可以明显减少再灌注早期脑缺血大鼠组织 ＲOS 细胞生成及减少脑梗死体积。
［关键词］ Ｒ( + ) 普拉克索; 急性脑缺血; 梗死体积; 氧自由基
［中图分类号］ Ｒ741． 02 ［文献标志码］ A 文章编号: 1671 － 7295( 2015) 04 － 0320 － 04
［引用本文］ 郭淑娟，王琮民． Ｒ( + ) 普拉克索对急性脑缺血大鼠脑损伤的保护作用［J］． 大连医科大学学报，
2015，37( 4) : 320 － 323．
Protective effects of Ｒ( + ) pramipexole on acute cerebral ischemia injury in rats
GUO Shu － juan1 ，WANG Cong － min2
( 1． Department of Geriatrics，the Central Hospital of Handan City，Handan 056001，China; 2． Depart- ment of Neurology，the Affiliated Hospital of Hebei Engineering University，Handan 056001，China)
［Abstract］ Objective To study the effects of Ｒ ( + ) pramipexole ( Ｒ + PPX) on the generation of reactive oxygen species ( ＲOS) ａnd to investigate the protective effects of Ｒ + PPX on brain tissue after cerebral ischemia in rats ａnd provide exper- imental basis for effective treatment for ischemic stroke． Methods The rat model of cerebral ischemia for 2 h ａnd reperfu- sion was established by thread occlusion． Ninty rats were divided into three groups randomly: sham group，middle cerebral artery occlusion ( MCAO) group ａnd the Ｒ + PPX + MCAO group． After reperfusion for 8 h ａnd 24 h，the volume of cere- bral infarct was determined by the TTC ａnd LOZEX － F image scanning，and the ＲOS positive cell number was monitored with the new fluorescent probe H2DCF － DA． Ｒesults No cerebral infarction was observed in the sham group but the cere- bral infarct volume increased significantly after 8 h ａnd 24 h reperfusion in both MCAO group ａnd Ｒ + PPX + MCAO group ( P ＜ 0． 05) ． After reperfusion for 8 h，the cerebral infarct volume in Ｒ + PPX + MCAO group was higher ａnd the number
of H2DCFA － DA positive cells was lower than that in MCAO group respectively ( P ＜ 0． 05) ，while both of them were not statistical different between the two groups after reperfusion for 24 h ( P ＞ 0． 05) ． Conclusion Ｒ + PPX intervention might
reduce the cerebral infarct volume ａnd protect the brain by decreasing the generation of ＲOS cells in early stage of cerebral ischemia in rats．
［Key words］ Ｒ( + ) pramipexole; acute cerebral ischemia; infarct volume; reactive oxygen species
基金项目: 国家自然科学基金项目( 81400934)
作者简介: 郭淑娟( 1979 － ) ，女，山东聊城人，副主任医师。E － mail: 13931021057@ 163． com
通信作者: 王琮民，教授。E － mail: qiierrsann@ 126． com
脑卒中一般分为缺血性和出血性两种，缺血性脑卒中约占 75% ，是致残和致死率高、治疗难的一种神经系统疾病。其发病机制一般认为是由于缺血缺氧诱发的兴奋氨基酸毒性的释放和细胞内钙超载，使肌体清除氧自由基( ＲOS) 能力下降，氧自由基大量增加*终导致氧化应激损伤［1］。因此，及早阻断或清除多余的 ＲOS 可以减轻缺血后脑损伤。
普拉克索( PPX) 分S － PPX 和Ｒ + PPX 两种异构体，两者都有抑制 ＲOS 产生的作用，属于线粒体靶向抗氧化剂，前者是治疗帕金森病的常用药，后者和多巴胺D2 / D3 受体亲和性极低，一般不会产生多巴胺能不良反应［2］。已有报道指出，Ｒ + PPX 可抑制肌萎缩侧索硬化( ALS) 的发展［3］，但其对缺血脑卒中损伤的研究鲜有报道。本实验利用线栓法制作中动脉栓塞( MCAO) 模型，通过腹腔注射 Ｒ + PPX，观察其在不同时间对各组脑梗死体积变化及大鼠脑中 ＲOS 数量影响，为临床治疗缺血脑卒中提供实验依据。
1材料和方法
1． 1 材 料
1． 1． 1 实验仪器及试剂: 大鼠呼吸机( 美国 CWE公司) 、DGD － 300S 电脑双极电凝器( 功率自动补偿型，铭志诚医疗公司) 、TDA － 8301H 温度显示调节仪、透射电镜( Olympus 公司) 、BH － 2 显微镜 ( 日本Phillip 公司) 、TTC ( 上海恒远生物科技有限公司) 、Ｒ + PPX ( 天津大学科威公司) 、新 型荧光探针H2DCF － DA( Sigma 公司) 。
1． 1． 2 实验动物分组及模型制备: 成年雄性健康大鼠 60 只，体重 250 ～ 300 g，购于天津市实验动物研究所，清洁级，并在河北工程大学医学院动物实验室进行实验。实验室设备齐全，实验条件良好。采用抽签方法将 60 只健康雄性大鼠均分为 3 组: 假手术( sham) 组，中动脉栓塞( MCAO) 组和 Ｒ + PPX 注射中动脉栓塞( Ｒ + PPX + MCAO) 组，每组 20 只。再灌注分为两个时间点，8 h 和 24 h，每次 10 只。Ｒ + PPX + MCAO 组于 MCAO 前 30 min 腹腔注射Ｒ + PPX( 1 mg / kg) ，sham 和 MCAO 组注射等量的生理盐水。
大鼠用 10% 水合氯醛过量麻醉，仰卧固定，颈部正中切口，逐层分离左侧颈总动脉( CCA) ，颈内动脉 ( ICA) ，颈外动脉 ( ECA) 。用动脉夹夹闭左侧
CCA 和 ICA，在 ECA 上剪一小口，注入肝素钠生理盐水，将准备好的尼龙栓线插入 ECA，用手术线轻轻结扎，松开 ICA 的动脉夹，尼龙线顺势插入 ICA， 至 ICA 和 ECA 交叉处，然后调整插入栓线角度，要保证栓线的头部进入 ICA，然后缓慢向 ICA 入颅方向移动栓线约 18 mm 至大脑前动脉起始处，阻断大脑中动脉血液供应，MCAO 建模成功，记录 MCAO时间，将栓线扎紧，移去 CCA 动脉夹，并且缝合各层的皮肤组织，栓线应在切口外留 2 cm，MCAO 2 h时，将栓线轻轻拉出，线栓头端退回 ECA 处，再灌注完成。手术完毕可用庆大霉素注射液冲洗伤口，手 术过程规范、无菌，此过程大鼠体温保持在( 37 ±
0.5) ℃ ，心率和动脉压保持在正常范围内。
1.2 方 法
1． 2． 1 脑梗死体积计算［4］: 缺血再灌注 8 h 或 24 h
大鼠用水合氯醛( 10% ) 过量麻醉，断头取脑，在
－ 24 ℃ 冰箱中冷冻全脑 30 min，从额极至枕极把大脑切成 2 mm 厚度的冠状切片 5 个层面，将切片置于 2% TTC 染色液中，在 37 ℃ 条件下，避光孵育 20 min，将 5 个切片顺序摆放在蓝色背景平板上，拍照，计算脑梗死体积百分比。脑梗死体积百分比 = 梗死体积 ÷ 全脑体积 × 100% 。
1． 2． 2 H2DCF － DA 染色分析［5］: 将 TTC 染色后制 作的脑组织冷冻切片各取第 4 片连续冷冻再切片， 切为 20 μm 10 片，利用 H2DCF － DA 进行染色，检测ＲOS 阳性表达，用专业图像分析软件 NIS Element 确定半暗带区 H2DCF － DA 阳性细胞数和平均荧光强度，荧光强度平均值 = 总荧光强度值/ H2DCF － DA 阳性细胞数。
1.3 统计学方法
用 SPSS17． 0 软件采用 x ± s 描述统计数据，用 t检验法对两组独立数据进行检验，用单因素方差分析对统计值进行比较，P ＜ 0． 05 为差异有统计学意义。
2结 果
2.1 3 组大鼠 MCAO 建模过程的生理指标检测值建立大鼠中动脉栓塞模型过程中，3 组大鼠的
心率、动脉压和肛温差异经单因素方差分析差异无显著性意义( P ＞ 0． 05 ) ，可以忽略手术对实验动物的影响。见表 1。
表 1 3 组大鼠在 MCAO 建模过程的生理指标检测值
Tab 1 The physiological parameters of three groups at different time ( x ± s)
组别 心率( 次/ min) 动脉压( mmHg) 肛温( ℃ )
sham 组 340． 73 ± 10． 07 99． 76 ± 10． 53 37． 09 ± 0． 33
MCAO 组 345． 04 ± 9． 45 99． 34 ± 9． 96 36． 85 ± 0． 53
Ｒ + PPX + MCAO 组 342． 72 ± 11． 31 98． 93 ± 10． 02 36． 95 ± 0． 34
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