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恒远文献：白细胞介素6水平在大鼠深静脉血栓形成中的变化

点击次数： 496发布时间：2011/3/7

上传者：上海恒远生物科技有限公司
上传时间： 2020/1/17 10:55:45
文件大小： 212KB
文件类型： pdf
所属分类：论文
下载次数： 111次
查看次数： 496

资料简介：

白细胞介素 6 水平在大鼠深静脉血栓形成中的变化
屈碧辉，何涛，胡敏，王迪乐
（湖北省武汉市中心医院血管外科，湖北武汉 430014）

摘要目的：探讨白细胞介素 6（IL-6）在深静脉血栓形成（DVT）中的变化与作用。方法：60 只雄性 SD 大鼠随机分为假手术组（n=10）与模型组（n=50），模型组大鼠采用双侧股静脉钳夹联合后肢石膏制动诱导后肢 DVT，并分别在造模后 2、5、10、15、25 h 各处死 10 只大鼠取材，观察股静脉血栓形成情况；用 real-time PCR 检测股静脉内皮组织 IL-6 mRNA 含量；ELISA 法检测血清 IL-6、纤溶酶原激活物抑制物（PAI）和纤溶酶原激活物（tPA）水平。结果：模型组大鼠造模后 2 h 未见血栓形成，但从 5 h 开始出现血栓形成，并随着时间的延长，血栓形成逐渐增多。模型组大鼠股静脉内皮组织中的 IL-6 mRNA 水平在造模后逐渐升高，于 15 h 达高峰；模型组大鼠血清 IL-6、PAI 含量变化情况与 IL-6 mRNA 变化一致，但血清 tPA 浓度变化则与前两者相反。模型组以上各指标在各时间点与假手术组间的差异均有统计学意义（均 P<0.05）。结论：在大鼠 DVT 过程中 IL-6 水平升高，其可能通过促进 PAI 的产生、抑制 tPA 的活化来促进血栓的形成。 [中国普通外科杂志, 2014, 23(6):765-768]关键词静脉血栓形成；白细胞介素 6；纤溶酶原激活物抑制物；组织型纤溶酶原激活物；大鼠中图分类号：R654.3静脉血栓栓塞（venous thromboembolism，VTE）是临床三大血栓性疾病（心肌梗死，缺血性脑卒中和静脉血栓），也是临床上*常见的静脉疾病 [1]。深静脉血栓（deep vein hrombosis，DVT）是常见的静脉血栓栓塞，是常见的创伤或骨科手术术后并发症，尤其对于严重创伤和恢复缓慢的老年患者而言，长期卧床容易导致下肢深静脉瘀滞，形成 DVT[2-4]。深静脉血栓的早期预防和治疗非常重要。有研究 [5-7] 表明，炎症与血栓形成之间存在着密切的联系，一方面炎症促进高凝状态，另一方面血栓形成中的物质也可引起炎症。白细胞介素 6（IL-6）具有多种生物学活性，是炎症反应的重要因子 [8-9]。本研究利用大鼠后肢深静脉血栓模型，利用 real-time PCR和 ELISA 检测静脉内皮组织和血清中 IL-6 及相关因子的含量变化，探讨 IL-6 在血栓形成中的作用，为其临床预防和早期诊断奠定基础。
1　材料与方法
1.1 材料
实验动物：雄性清洁级 SD 大鼠，8~12 周龄、体质量（235 ± 35）g，60 只；主要试剂：反转录试剂盒购自 TAKATA 公司；Real-time 试剂盒购自全式金生物技术有限公司；IL-6、纤溶酶原激活物抑制物（PAI）、纤溶酶原激活物（tPA）ELISA
试剂盒购自上海恒远生物技术发展有限公司。
1.2 方法
1.2.1 大鼠创伤性 DVT 模型的建立和分组　将50 只清洁级雄性 SD 大鼠采用蚊式钳钳夹双侧股静脉联合石膏制动双下肢构建大鼠 DVT 模型（模型组），10 只 SD 大鼠切开大腿皮肤后缝合创口作假手术处理（假手术组）。模型组分别在造模后 2、5、10、15、25 h 各处死 10 只大鼠取材，用于各指标的检测。1.2.2 RNA 提取和 real-time PCR 检测组织中IL-6 含量　将钳夹部位的股静脉（约 2 cm 长）连同周围组织一同取下，用生理盐水漂洗，去除血管内的血栓和杂质，显微镜下分离静脉内皮组织，裂解组织，一步法提取大鼠深静脉内皮组织总 RNA，测定浓度与质量。取 1 μg 作为模板，按照 PrimeScriptTM RT reagent Kit 说明书反转录得到细胞 cDNA。使用 TransStart®Top Green qPCR SuperMix 试剂盒进行实时定量 PCR 实验，所用仪器为 ABI StepOne Real time PCR system。用于IL-6 实时定量 PCR 的引物序列为：5＇-GAG AAA AGA GTT GTG CAA TGG C-3＇和 5＇-ACT AGG TTT GCC GAG TAG ACC-3＇。
1.2.3 大鼠血清制备　大鼠腹腔内注射 1% 戊巴比妥钠麻醉，摘取眼球法取血 8 mL。3 000 r/min 离心 10 min，将上清转移至新的无 RNA 酶的 EP 管中，12 000 r/min 离心 2 min，收集上清，-80 ℃保存待用。
1.2.4 ELISA 检测血清中 IL-6、PAI、tPA 含量按照 ELISA 试剂盒说明书所述，制成标准曲线，将血清用标本稀释液按照 1:1 稀释后加入反应孔内，震荡混匀，37 ℃温育 1 h，洗涤液洗涤，加入生物素化抗体工作液，37 ℃温育 1 h 后洗涤，分别加入
底物 A、B 液，震荡混匀，37 ℃避光显色 15 min，迅速加入终止液，450 nm 波长处测定 OD 值
1.3 统计学处理
全部结果均采用 SPSS 13.0 软件分析。数据以均数 ± 标准差（x±s）表示。多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用 q 检验，P<0.05 为差异有统计学意义。
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