（1）问：小鼠乙酰胆碱Elisa试剂盒后期数据处理中空白的OD值有什么作用？

     答：可以将标准品和样本的OD值同时减去空白的值进行计算，或者都不减，保持同一水平就行。 

（2）问：那我们算出来的ACH含量为什么出现负值？

     答：说明个别样本的浓度很低,当浓度接近第6个点的时候,直线方程就有可能计算出负值。

（3）问：小鼠乙酰胆碱ELISA试剂盒，组织标本 切割标本后能用生理盐水稀释吗？还有稀释的倍数是多少?

     答：生理盐水也可以，加入量1:3。

（4）问：我想问一下，标准品浓度与标准品吸光度值之间是不是线性回归？检测出来的吸光度值很低一般都存在哪些原因？大部分在0.08左右 ？（大鼠5羟色胺（5-HT）Elisa试剂盒）

     答：是线性回归。检测出来的值比较低 ，样本、稀释、操作等，原因很多，但只要在可操作范围就行 。 

（5）问：做出来的结果：标准品的吸光度呈线性回归，但是样品的吸光度都和本体吸光度值接近，正常未予干预的大鼠血浆都基本没有5-HT 表达，这是什么原因？（大鼠5羟色胺（5-HT）Elisa试剂盒）

     答：样本、稀释、室控和机器操作等，原因都可能造成吸光度都和本体吸光度值接近，好像荧光法里面有种试剂盒可以检测滴度。

（6）问：Elisa试剂盒的使用的方法是什么啊？

     答：采用双抗夹心法 （目前暂行）

（7）问：一个孔需要多少量的血清？

     答：一个孔上样量10-50微升。

（8）问:未处理的样本我需要邮寄多少的量？

     答：每个孔需要100ul

（9）问：样本怎么保存？

     答：当天要用的样本保存4℃，隔天样本-20℃（近期一个月左右要用的样本），长期保存样本-70℃（一年或者更长时间多久都可以用），避免反复冻融。

（10）问：EP管是什么管？

      答：离心管。

（11）问：收集血清的时候用什么管？

      答：普通离心管即可。

（12）问：96t可以检测多少个样本？48t可以检测多少个样本？

      答：96t标准的可以检测85个样本，其他有10个标准品孔，1个空白对照。96t单孔可以检测90个样，7个标准品控 1个空白对照。48t标准的可以检测37个样本，其他有10个标准品孔，1个空白对照。48t单孔可以检测40个样本，其他有7个标准品孔，1个空白对照。

（13）问：标准的检测85个样本的和单孔相比， 有什么好的地方吗？

      答：标准的检测又叫复孔检测，标准的检验重复性测的结果好，所以大家都叫复孔是标准的检测。

（14）问： 酶标板分次使用 剩下的建议怎么保持 ？

      答：要是真的用不完或标本不多的情况下。做点处理后：板条和板架都是可拆卸的，可以再用之，前拆下4条放置锡箔袋或其他无污染的袋子，放到冰箱 2-8度保存。

（15）问：酶标包被版是酶标板吗？

      答：是的。

（16）问：请问植物茉莉酸和水杨酸检测的试剂盒，我们提取拟南芥的，一般取样量是多少？

      答：1-3g。

（17）问：大鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)ELISA，大鼠血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5B），我发现试剂盒里缺少标准品稀释液，没有它我的实验无法进行，盒子里面有特殊稀释液是用来稀释样品的，但都没有标准品稀释液，我的样品已超出检测限，所以需要稀释标准品才行吗？

     答：特殊稀释液是用来稀释标准品的，特殊稀释液一般情况不用当样本浓度特别高是先用特殊稀释液稀释，标准品需要再稀释就也要用特殊稀释液。

（18）问：测出来的标准曲线值前面几盒都是0.98 才正常，后面怎么变成0.93了？

      答：某个点偏离大可以去掉，保留5个点

（19）问：是不是空白对照就是什么都不加？

      答：不加样本，不加样本稀释液，不加酶标试剂 其他都可以加。

（20）问：样本稀释液是配好的吗？

      答：样本稀释液是配好的

（21）问：样本稀释液可以用来直接稀释血清吗？

      答：可以，直接加40ul就可以。

（22）问：检测的时候需要在操净台中操作吗，还是在外面操作就可以了？

      答：要求不是很严格，根据自己实验室的设备而定，都可以。

（23）问：人和肽素（copeptin）Elisa，洗涤液是浓缩的，是一次配好，还是现配现用？

      答：浓缩的，现配现用。

（24）问：Elisa方法的不测人血小板第四因子里IgG抗体的滴度吗？

      答：Elisa不测滴度的，荧光法可以测。

（25）问：酶标板不平，影响结果吗？

      答：不影响结果的。

（26）问：小鼠TNF-α ELISA 我的标本是细胞，我想要测的结果：抑制TNF的产生  空白组、模型组、药物组，药物组要成梯度抑制TNF的产生、请问Elisa方法的可以测吗？

      答：细胞可以测 但要分组，得到相应的梯度值，计算结果。自己需要多查阅文献 。

（27）问：人睾酮(T)Elisa,人雌三醇（E3）Elisa，是用什么酶标记的？

      答：辣根酶标记的  标本里不能加叠氮化钠

（28）问：我测植物水杨酸，标本是烟草叶片怎么处理的？那上清液检测SA时，还需要用甲醇抽提吗？

      答：称取烟叶500mg，研磨成粉末状，加入5ml浓度为0.01mol，PH值为7.4的PBS溶液，充分匀浆，离心取上清液（3000-4000转，15分钟左右），分装保存，一般需要长期保存需放在-80度，或者液氮中，备用，不用加甲醇。

（29）问：没有做出标准曲线来，你知道什么原因吗？

      答：操作肯定有问题，做之前把标准品摇匀下。

（30）问：买同一个指标的几个盒子，用不用都做标准曲线？

      答：如果同一个指标买了3盒，建议每盒都做个标曲。同一个盒子 ，即使分几次用，做一个标曲也行了，因为数值不会偏差太大，差不多。

（31）问：那个特殊稀释液是做什么的？

      答：一般情况都不要用的，他的的用途就是稀释标准品。但是,现在标准品已经稀释好了，所以不需要用了。如果你需要更多的标准品的话，可以用他来稀释。

（32）问：你们的试剂盒什么成分是进口的 什么事国产的？板子酶标和抗体是国产的还是进口的？

      答：抗体、酶标试剂、酶标板都是进口的、其他试剂是国产 严格按照标准操作完成 呵呵 

（33）问：比如说我偶然发现只加样本稀释液的也出现浅黄色，这怎么解释呢？

      答：可能的原因是：①洗板时有交叉感染。②样本稀释液中本身有本底的一个较小的读数。也是ELISA的一个局限性，免疫的很多反应稀释液 洗涤液发挥了很重要的作用，不加的话效果不明显，但是加了以后有些成分可能有一部分的干扰作用，可以比较不同的厂家的盒子 都存在这些局限性的，但不影响*终的结果，ELISA严格的说就是一个半定量的方法。

（34）问：那标准品出现跳孔是怎么回事？

      答：你完全可以拿同样的标准品再重新做一次 ，做之前摇匀一下，肯定可以做好 。那是操作问题了 ，你可以再做一次的，之前也有客户出现过类似的问题，学生做了2次都没做好，后来老师自己做，就是摇匀了一下，其他操作都一样，标准曲线做的很完美。

（35）问：建议标准做复吗？

      答：标准品做复孔是的

（36）问：血清和肠道粘膜匀浆上清，可以用一个盒子吗？

      答：可以！

（37）问：36个样品，定96T的，可以测一个重复吧

      答：可以

（38）问：不同盒子里的孔下次能不能用？

      答：一个盒子有96孔和48的 要是真的用不完或标本不多的情况下，做点处理后在存放。

（39）问：什么叫点处理？

      答：板条和板架都是可拆卸的，可以再用之前拆下4条放置锡箔袋或其他无污染的袋子，放到冰箱 2-8度保存。

（40）问：不同批的试剂能不能用？

      答：同样的盒子不同的批号或是同一个批号，也是不建议混用的。同样的盒子，分两次的结果应该是不一样的，但数据部应相差太大，应在可控制或接受范围。

（41）问：为什么不建议混用？

      答：不同批号的不可以混用 原因很简单若不同批号的混用的话 可能得出的结果不是您想要的 数据可能偏差较大

（42）问：测细胞内的蛋白的话怎样处理样本 ？

      答：ELISA实验前需对标本进行处理将目的蛋白释放出来，其他按常规方法处理即可。

（43）问：代测可以直接接受没有处理好的样品吗？

      答：可以

（44）问：每个肌肉和肝脏样本，*少需要多少克？

      答：1克就可以了。

（45）问：96T的一次用不完，40天以后再用，如何存放？

      答：标准品放-20度 ，其他放4度，并且板条要密封好。

（46）问：标曲做两个重复少不少？

      答：不少。

（47）问：试剂盒不同批次会对实验结果有影响吗？

      答：有一定的影响，但是影响不是很大。

（48）问：能不能直接用软件分析数据呢？

      答：可以，用EXCEL或者用SPSS等统计软件。

（49）问：是不是空白就是什么都不加吗？

      答：空白不加样本，不加样本稀释液 ，不加酶标试剂，其他都可以加。

（50）问：你们这个试剂盒要多少上样量？

      答：上样量没有什么限制, 每个孔的上样量是10ul。

（51）问：我两个空白孔一个啥都不加，一个加了后面的A液，B液还有终止液, 请问用哪一个？

      答:用加了A液，B液还有终止液的那个更加准确,因为样本都加过这些，可以排除相应的干扰。

（52）问：离心完以后用什么管子保存？

      答：离心完用EP管保存就可以。

（53）问：收集病人血液标本的时候用什么管？

      答：用普通的离心管收集就可以

（54）问：抗体和底物都是进口的吧？

      答：是的，底物就是TMB 进口的。

（55）问：测的是不同的物质为什么测的波长一样呢？

      答:ELISA的波长全是450, 这就是ELISA,不一样的话，那就是比色法了，不是ELISA。组织匀浆后就可以检测。

（56）问：说明书写要7个标准品是做什么用？

      答：7个标准品，只要6个，第七个是空白对照 。 

（57）问：抗凝剂可以用EDTA吗？或者加什么做为抗凝剂？

      答：可以,肝素或者EDTA。

（58）问：Elisa代测结果表格每组表达什么？

      答：S1-S5 代表 标准品个表格是吸光度 第二个是对应表 第三个是数据处理（是根据标准品那个线性关系出来的）第四个表*终结果是都乘以5得到的问：为什么×5？答：因为我们做的时候是10ul样本+40ul样本稀释液做的 问：那个U是代表什么？答：U是调零的，什么都不加。 

（59）问：为什么检测结果*终结果单位表达不一样？

      答：ng/ml是质量单位， pmol/L是浓度单位，一般是没法换算的，在采购试剂盒时请用户说明单位，1ng/ml = 1000pg/ml。
    两大主题演讲完后，台下各位科研者以及实验新手都踊跃提问，积极互动，上海恒远的技术巡回讲座第二站圆满落幕！我司获得BIM品牌ELISA试剂盒专业代理权，欢迎来电咨询哦！
                    
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