【产品名称】:大鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白试剂盒

【敏感性】： ＜5pg/ml

【特异性】： 系统和其它细胞因子无交叉反应。

【保存】： -20℃ [短期内（如两周）可4℃]

【有效期】： 12个月（-20℃）。

【用途】： 用于体外定量分析液体标本（通用型）。

标本收集:

1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA，标本采集后30分钟内于 1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂标本。

3. 其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测

4. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。

5.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃电冰箱内，避免反复冻融，1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。

6. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。

试验所需自备物品:

1.  酶标仪（450nm波长滤光片）

2.  高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl

3.  37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水

4.  吸水纸

检测前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释（1:25）。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液。（加热温度不要超过50℃）使用时洗涤液应为室温。

3.  标准品: 加入标准品&标本稀释液1.0ml至冻干标准品中，静置10分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀（浓度为5000 pg/ml）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度： 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39.05、0 pg/ml。样品稀释液直接作为空白孔 0 pg/ml。如配制2500pg/ml标准品：取0.5ml （不要少于0.5ml ）5000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μl/孔计），实际配制时应多配制100-200μl。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体（1:100）成工作浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μl/孔计），实际配制时应多配制  100-200μl。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体（1:100）成工作浓度。当日使用。

洗涤方法:

1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μl，注入与吸出间隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μl，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。洗板5次。

大鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白试剂盒操作步骤:

实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。

1、 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育2小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2、 弃去液体，甩干，每个孔中加入Detection Ab工作液 100μl（在使用前15分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育1小时。

3、 弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约350μl /每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。

4、 每孔加HRP Conjugate工作液（临用前15分钟内配制）100μl，加上覆膜，37℃温育1小时。

5、 弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。

6、 每孔加底物溶液100μl，酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。

7、 每孔加终止液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。

8、 立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（OD值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。

9、 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至有效期结束。

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