一、详细参数
【产品名称】：人肿瘤坏死因子γ（TNF-γ）elisa试剂盒厂家

【检测方法】：酶联免疫法/酶免法(ELISA)

【产品性状】：96T/48T，盒装液体(两种统一规格)

【贮藏条件】：2-8°C

【产品有效期】：我公司Elisa试剂盒均为*新批次，可放心购买。

【产品主要成分】：酶标板,试剂,标准品等。

【种属】马铃薯、鹿、羊、鸡、鸭、鱼、人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛等动植物。

【产品单价】（具体折扣来电咨询），可免费代测，含税含运费。

【标本】血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等

注：标本必须为液体，不含沉淀。

二、四大特性

1．特异性强：不与其它细胞因子反应。

2．重复性好：板内、板间变异系数均小于10%。

3．稳定性高：实验效果很稳定。

4．超灵敏度：*小的检测浓度小于1号标准品，稀释度和样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

三、具体操作方法

以双抗体夹心法为例展示：

1、双抗体夹心法检测抗原

操作步骤如下：

1）将特异性抗体与固相载体结合，形成固相抗体。洗涤除去尚未结

合的抗体及一些杂质。

2）加入待测标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。

3）加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。

4）加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如 HBeAg、HBsAg、hCG 、AFP等。只要获得针对受检抗原的特异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标所使用的抗体分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步检测。

在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成"夹心复合物"。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值相同，如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质（例如血清中 HBsAg、AFP 和尿液 hCG 等）时，应注意可测范围的值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。

四、客户收集样品要求

·客户需提供待检测抗体和包被用抗原。

·检测的样本为细胞培养上清、人和动物的血清、血浆。

·样本收集后应立即-20℃保存，若长期保存应-70℃。

·样本量的要求：若一个指标做复孔检测应不少于250ul，做单孔检测应不少于120ul。建议若客户样本量充足提供500ul以上。

·客户的样本收集后，立即按要求保存，切忌反复冻融。外地客户邮寄需要用干冰运输。邮寄前请与技术支持沟通确认。

五、Elisa试剂盒组成

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶

2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（480ng/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶

4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份

5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张

6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个

六、Elisa试剂盒标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

七、操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

240ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液

120ng/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液

60ng/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液

30ng/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液

15ng/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。

八、咨询和订购的方法

1.可来电向我们直接咨询及订购。

2.可点击本页上方“QQ交谈”向我司在线人员咨询及订购。

3.可在本页下方留言栏内留言，我们会在半个工作日内联系您

公司是中国ELISA试剂盒的专业的销售平台和贸易中心，公司的ELISA试剂盒现全部实行“特价优惠”，望新老客户前来购买。

标本处理
1. 本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。
2. 实验前应预测标本含量，如果标本浓度过高，应对标本进行稀释，使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。标本使用0.01mol/L的PBS稀释(PH=7.0-7.2)。
3. 若所检样本不包含在说明书所列样本之中，建议进行预实验验证其有效性，并注意留存样本。
4. 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。
5. 若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。
6. 某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。
7. 建议使用新鲜样本，保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。

需要而未提供的试剂和器材
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水


注意事项
1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6.在储存和温育时避免强光直接照射。
7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9.不能使用过期产品。
10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

操作流程
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

性能特点
1. 检测范围：0.5 U/mL – 16 U/mL。
2. 灵敏度：检测浓度小于0.1 U/mL。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

说明
1. 由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。
2. *终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。
3. 不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。
4. 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到*佳的检测结果。

常见问题
若实验效果不好，请及时对显色结果拍照，保留所用板条及未使用试剂，并妥善保存，然后联系我公司技术支持为您解决问题。同时您也可以参考以下资料：
问题 可能原因 解决方案
标准曲线差 吸取及洗涤不充分 充分的吸取及洗涤
移液不精确 检查和校正移液器
精密度低 洗涤不充分 按说明书要求充分洗涤和浸泡
混匀不充分和吸取试剂不足 充分混匀和吸取试剂
重复利用吸头、容器和覆膜 使用加样器要更换新的吸头、使用新的容器和覆膜
加样不精确 检查和校正移液器
O.D值低 每孔加的试剂量不精确 校正移液器，精确加入试剂
温育时间不正确 保证充足的温育时间
温育温度不正确 试剂要平衡至室温并保证准确的温育温度
酶标记物或底物失效 通过混合酶标记物和底物，颜色应迅速显现来检查
没有加入终止液 按照说明书实验操作步骤加入终止液
超出读数时间读数 在说明书推荐的读数时间内读数
样本值 不正确的样本储存方式 正确储存样本，使用新鲜样本进行实验
不正确的样本收集和处理方法 采取正确的样本收集和处理方法
待测物质在样本中含量低 使用新鲜样本，重复实验