近年来，EIA技术取得了显著的发展，主要表现在以下方面：

1、继单克隆抗体后的第三代抗体基因工程抗体的应用，明显地提高了检测的特异性，基本消除了抗原、抗体间的非特异xing jiao叉反应，保证了分析的准确性。抗体制备技术的进步，使试剂的生产制备得以规模化，检测范围日益扩展，小分子抗原、半抗原的检测成为事实。

2、分析方式的改进与多样化提高了试验的敏感性。

（1）除早期的竞争法，间接法外，又发展了双抗原夹心法测抗体，偶联酶标记法测抗原，桥联酶免疫分析，酶放大免疫分析技术等，后者应用了生物素-亲和素系统，底物循环放大系统，酶-抗酶放大系统及酶偶联放大系统等。

（2）由于酶标记技术的进步，标记酶的应用已从过氧化物酶，扩展到碱性磷酸酶，β半乳糖苷酶，尿素酶，葡萄糖6磷酸脱氢酶，葡萄糖氧化酶，苹果酸脱氢酶，至有二十多种酶被应用于EIA ，但应用比较多的仍然是辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP）和碱性磷酸酶（Alkalinephasphotase，ALP）。

（3）酶免疫分析与其它标记免疫分析相结合如与荧光免疫分析（Fluorescence Immunoassay ,FIA）结合形成荧光酶免疫分析（Fluorescence Enzyme Immunoassay ，FEIA），酶促放大时间分辨荧光免疫分析（Enzyme-am-plified time-resolved fluoroimmunoassay ，EATRFIA），EIA与化学发光免疫分析（Chemiluminescence immunoassay，CLIA）结合形成酶—化学发光免疫分析，增强化学发光酶免疫分析（ECLEIA）。EIA与聚合酶链反应结合形成的PCR-EIA分析等。

（4）改进固相载体的技术

传统ELISA应用的固相载体是聚苯乙稀微孔板，聚苯乙烯珠或条，后发展为硝酸纤维素膜、活化滤纸、硅片、尼龙、利用高分子材料合成的各种固相微粒等。为提高固相表面的结合容量，增加结合物的范围而改造聚苯乙烯的表面，如用化学偶联法导入功能性醛基、酰基、烷胺基等以更好地与蛋白质，多肽的羧基结合，用位点导向性共价偶联法引入亲和素，蛋白A，多聚赖氨酸等，以牢固地捕获蛋白或多肽，超平整聚苯乙烯表面的制备，克服了表面粗糙带来的不均性，达到平均粗糙度只有2A+的超平整平面，实现了对蛋白的结合容量大，脱附率低，孔间均性好，使试验精密度达5%。

应用于双抗体夹心法时，聚苯乙烯经射线照射后，可以增加其吸附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能。近年美国Corning公司研制成功表面经琥珀酰亚胺酯活化酶标板，其质量达到氨基活化相似水平。

（5）分析方法的创新 如同步ELISA法测定多种抗体是将抗原包被在与微孔相匹配的钉板的钉子上，盖上钉板的同时与微孔内的所需标本、试剂反应，是又种改良ELISA。利用抗体和抗抗体能形成多层复合物的特性，将常规二步温育法改为步温育测定法，使检测时间大为缩短，现在已广为应用。

原创作者：上海劲马实验设备有限公司