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技术文章
劲马生物|关于无外泌体血清的制备步骤以及相关注意事项
点击次数：6781 发布时间：2024/1/19 10:37:15
无外泌体血清是一种可由多种细胞分泌的直径为30-150nm的膜性小囊泡。经研究后发现，其内含有独特的蛋白质与核酸分子，所含成份与其细胞来源密切相关，这也决定了无外泌体血清的功能特异性，如抗原提呈、信号传导或诱导抗肿瘤免疫反应、细胞迁移、细胞分化、细胞间通信、肿瘤转移等。目，无外泌体血清研究已经成为临床诊断与基础医生的新热点。
以外泌体为代表的细胞外囊泡是近几年研究的热点，目的外泌体研究主要通过研究体外培养细胞来源的外泌体，分析其在体内外的功能作用。一般的血清FBS中含有供体细胞自然分泌的大量Exosomes，而用于Exosome研究的细胞必须提更换无外泌体的血清进行培养，以减少对后续实验结果的污染。
目市面上存在着商业化的无外泌体血清，然而由于其价格较高等因素，很多研究者选择自己制备无外泌体血清，而常用的主要是基于超速离心的无外泌体血清分离方法。
一、无外泌体血清产品特点：
1、内毒素含量低，三次纳米过滤
2、严格控制批次差异
3、来源可靠、可溯源
4、每个批次提供相应检验检疫报告
5、适合各种特殊细胞培养
6、干冰运输，建议存储温度为-20℃至-10℃
二、无外泌体血清制备步骤：
1. 根据需要处理的血清体积选择合适的转子与超离管。
2. 在超净工作台，将普通血清置于超离管中，配平后，进行热封口。
3. 将封口后的超离管放于离心机转子中，并加入相应适配器然后拧紧转头盖。
4. 设置离心程序：4℃，120,000 ×g，离心18小时（也有研究者选择100,000 ×g离心18小时）。
5. 离心结束后，回收上清液，为避免污染，在超净工作台操作。
6. 收集得到无外泌体血清，并储存于-20℃中备用。
三、无外泌体血清的这些注意事项请注意了：
1. 离心后，血清外泌体会富集在管底和管壁；
2. 吸取血清时，只吸取澄清部分的血清，并且远离上图中标记的区域；
3. 吸取70-80%的澄清的血清；
4. 其余的浑浊血清留作正常细胞的的营养物添加使用，避免浪费。
5. 如果觉得纯度不够，再把离心后收集的血清做二次超速离心。
6. 针对超速离心后的血清，必须进行粒径检测（离心样品和离心后样品），该数据可以放到文章补充材料中，用来证明无血清外泌体制备成功。
原创作者：上海劲马实验设备有限公司
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