【包装规格】
96T/盒

【预期用途】
仅供科研使用，本试剂盒用于测定鸭血清、血浆及相关液体样本中黄病毒(Flavivirus)表达。

【检测原理】
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸭黄病毒(Flavivirus)表达。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中黄病毒(Flavivirus)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中鸭黄病毒(Flavivirus)的存在与否。

注意：使用请检查试剂盒中试剂的标签和数量与表格是否一致。
需要但未提供的材料及耗材
  1、酶标仪（建议仪器使用提预热）
2、精密移液器、吸头、加样槽
3、蒸馏水或去离子水
4、洗瓶或者自动洗板机
5、37℃水浴锅或恒温箱
6、EP管
7、无粉一次性乳胶手套
【储存条件及有效期】
  1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。
  2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。
注意：试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在次实验后1 个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。

【适用仪器】
  半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。
细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.样本保存和稳定性
样本在2-8℃条件下，可以储存72h，在- 20℃或-80℃可以储存6个月及以上。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融。

【操作步骤】
1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）。
2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
8.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震
9.荡混匀，37℃避光显色10-20分钟。
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意：
1.试剂准备：试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用。准备一次实验所需要的酶标条，其它的可从微孔板上拆下，密封，按照说明书要求保存，以备下次使用。
2.加样：实验操作中请使用一次性的灭菌吸头，避免污染。加样时注意不要有气泡产生，将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。与反应试剂加入一样，加样过程中个孔与后一个孔加样时间间隔尽量小（一般控制在10 分钟以内），如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。为了测值的准确性，推荐设置复孔进行实验。
3.温育：为防止样品蒸发，实验时请将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内，以避免液体蒸发，洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态，同时应严格遵守给定的温育时间和温度。
4.洗涤：浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。充分洗涤非常重要，在每次洗涤过程中，都要将洗涤液完全甩干。洗涤过程中反应孔内残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将吸水纸直接放入反应孔中吸水，同时要轻轻擦除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。如果使用自动洗板机，请在熟练使用后再用于正式实验过程中。
5.反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化，如观察到颜色较深，请提加入终止液终止反应，避免反应过强而影响酶标仪光密度读数。
6.底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。

【计算和结果判定】
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.20
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为鸭黄病毒(Flavivirus)阴性
阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为鸭黄病毒(Flavivirus)阳性

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