本试剂盒仅供研究使用
预期应用：ELISA 法定量测定兔子血清、血浆或其它相关液体中氧化低密度脂蛋白（OxLDL）含量。
兔子氧化低密度脂蛋白ELISA试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中OxLDL 水平。用纯化的抗体包被微孔
板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入OxLDL 抗原、生物素化的抗兔子OxLDL
抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化
下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的OxLDL 呈正相
关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板：一块（96 孔）
2. 标准品（冻干品）：2 瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10 分钟以
上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为50 ng/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释50 ng/ml，
25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56 ng/ml，0.78 ng/ml，样品稀释液直接作
为标准浓度0 ng/ml，临用前15 分钟内配制。
如配制25 ng/ml 标准品：取0.5ml 50 ng/ml 的上述标准品加入含有0.5ml 样品稀释液的
Eppendorf 管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液：1×20ml/瓶。
4. 检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5. 检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6. 检测溶液A：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100 稀释，稀释前根据预先计
算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul 检
测溶液A 加99ul 检测稀释液A 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液B：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B 1:100 稀释。稀释方法同检测溶
液A。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。
10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
兔子氧化低密度脂蛋白ELISA试剂盒标本的采集及保存
1. 细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。
2. 血清：标本请于室温放置2 小时或4℃过夜后于1000 x g 离心20 分钟，取上清即可检测，
或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
3. 血浆：可用EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后30 分钟内于2 - 8° C 1000 x g 离心15
分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
兔子氧化低密度脂蛋白ELISA试剂盒操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。
每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试
剂盒的检测范围。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标
准品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，
轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120 分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A 工作液100ul（取1ul 检测溶液A 加99ul
检测稀释液A 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60 分钟。
3. 温育60 分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3 次，每次浸泡1-2 分钟，350ul/每孔，甩干
（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4. 每孔加检测溶液B 工作液（同检测A 工作液） 100ul，37℃，60 分钟。
5. 温育60 分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5 次，每次浸泡1-2 分钟，350ul/每孔，甩干
（也可轻拍将孔内液体拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30 分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4 孔
有明显的梯度兰色，后3-4 孔梯度不明显，即可终止）。
7. 依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与
底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm 波长依序测量各孔的光密度（OD 值）。在加终止液后15 分钟以内进
行检测。
注：
1. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是*后加底物溶液及2NH2SO4。
测量时先用此孔调OD 值至零。
2. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
3. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、检测溶液A 工作液、检测溶液B
工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A 工作液或
检测溶液B 工作液。
4. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水
纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml 注入孔内，浸泡1-2 分钟，根
据需
要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
特异性
本试剂盒可同时检测重组或天然的兔子OxLDL，且与其它相关蛋白无交叉反应。
计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD 值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸
上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标
准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算
出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
兔子氧化低密度脂蛋白ELISA试剂盒注意事项
1. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
2. 一次加样时间控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
3. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。
4. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请*后乘以稀释倍数。
5. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
6. 底物请避光保存。
检测范围：
0.78 ng/ml - 50 ng/ml
说明
1. 在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，
试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。
2. 小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本/ 标准品，酶结合
物或底物时，个孔与*后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵
育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。而且，洗涤不充分将影响试验结果。
3. 试剂盒保存：部分试剂保存于-20℃，部分试剂保存于2-8℃，具体以标签上的标示为准。
4. 浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
5. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任
何影响。
6. 中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
7. 所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
8. 有效期：6 个月
电议 型 号：
