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当前位置:易推广>上海劲马实验设备有限公司>资料下载>大鼠二胺氧化酶Elisa试剂盒怎么操作?

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大鼠二胺氧化酶Elisa试剂盒怎么操作?

点击次数: 119发布时间:2011/3/7

  • 上 传 者: 上海劲马生物科技有限公司
  • 上传时间: 2014/11/5 9:33:12
  • 文件大小: 106KB
  • 文件类型: doc
  • 所属分类: 应用方法
  • 下载次数: 69次
  • 查看次数: 119

资料简介:

大鼠二胺氧化酶elisa试剂盒怎么操作?
请根据上海劲马生物提供的试剂
盒使用说明书查看详细操作步骤
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:                                                          96T
25 IU/L -800 IU/L
 
使用目的:
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中二胺氧化酶(DAO)含量
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本大鼠二胺氧化酶(DAO)水平。用纯化的大鼠二胺氧化酶(DAO)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入大鼠二胺氧化酶(DAO),再与HRP标记的二胺氧化酶(DAO)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的二胺氧化酶(DAO)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品大鼠二胺氧化酶(DAO)浓度。 
试剂盒组成 
1
30倍浓缩洗涤液
20ml×1瓶
7
终止液
6ml×1瓶
2
酶标试剂
6ml×1瓶
8
标准品(1600IU/L)
0.5ml×1瓶
3
标包被
12孔×8条
9
标准品稀释液
1.5ml×1瓶
4
样品稀释液
6ml×1瓶
10
说明书
1份
5
显色剂A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2张  
6
显色剂B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1个
标本要求 
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
800 IU/L
5号标准品
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
400 IU/L
4号标准品
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
200 IU/L
3号标准品
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
100 IU/L
2号标准品
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
50 IU/L
1号标准品
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
 
 
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 

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