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“上海劲马”文献：CD4 + CD25 + 调节性 T 细胞及 TGF-β在肺炎支原体肺炎患儿中的表达和意义
刘小群，陈兰举，陈啸洪，张佩红
摘要: 目的  初步探讨CD4 +  CD25 +  调节性T 细胞( Treg) 及转化生长因子-β  ( TGF-β  ) 在肺炎支原体肺炎( MPP) 发病中的作用及可能机制。方法   采用流式细胞术( FCM) 和 ELISA 法分别检测 2  组小儿( MPP 组及健康对照组) 外周血 CD4 + CD25 + Treg 细胞的比例及血清 TGF-β 水平，并分析二者之间的相关性。结果 ①MPP 组患儿外周血中 CD4 +  CD25 +  Treg 细胞比例和血清 TGF-β   水平分别为［(5． 59%  ± 1． 18% ) 和(467． 74 ± 142． 05) ng / L］，
与健康对照组［(8． 20%  ± 1． 76% ) 和(730． 05 ± 197． 21) ng / L］相比，均显著降低( P ＜ 0． 01);②MPP 组小儿血清 TGF-β   水平与 CD4 +  CD25 +  Treg 细胞比例呈正相关( r = 0． 71，P ＜ 0． 01)。结论  CD4 +  CD25 +  Treg 细胞比例及 TGF-β1 水平的降低可能参与 MPP 的发病。
关键词: CD4 + CD25 + 调节性 T 细胞;TGF-β ;小儿;肺炎支原体;肺炎
中图分类号:  Ｒ725． 6    Ｒ563． 1    文献标识码:  A    文章编号:1674-4152(2015)06-0971-03
肺炎支原体( Mycoplasma  Pneumoniae，MP) 是一种介于细菌和病毒之间的、能独立生活的微生物，已成为小儿下呼吸道感染的主要病原体。随着对 MP 基础研究的不断深入，认为 MP 除与呼吸道上皮细胞吸附及直接作引起肺炎支原体肺炎( Mycoplasma Pneu- moniae  Pneumonia，MPP) 外，细胞免疫反应也参与其中［1］。CD4 + CD25 + 调节性 T 细胞( CD4 + CD25 + regu- latory T cells，Treg) 因具有强大的免疫抑制功能而成为研究的热点，可能主要通过直接接触和分泌抑制性细胞因子( 如 TGF-β) 两大途径发挥免疫功能。本文通过检测 MPP 患儿外周血 CD4 + CD25 + Treg 细胞比例及血清转化生长因子-β1( TGF-β ) 水平，初步探讨 CD4 + CD25 + Treg 及 TGF-β 在 MPP 发病中的作用及可能机制。
1 资料与方法
1. 1 临床资料 选择 2009 年 11 月—2012 年 3 月在蚌埠医学院附属医院住院并诊断为 MPP 的患儿30 例设为 MPP 组，平均年龄(4． 8 ± 1． 2) 岁，其中男 16例，女 14 例。诊断参照《实用儿科学》第七版关于肺炎支原体诊断要点［2］。选择同期门诊健康体检儿童30 名设为健康对照组，平均年龄(4． 3 ± 1． 5) 岁，其中男 15 例，女 15 例。2  组间年龄、性别差异无统计学意义( P ＞ 0． 05)。
1. 2 主要试剂 FITC 标记小鼠抗人 CD25 单克隆抗体、PerCP 标记小鼠抗人 CD4 单克隆抗体、溶血素，均购自美国 BD 公司;PBS 缓冲液( 自备) ，人 TGF-β1  试剂盒( 上海劲马生物科技有限公司)。
1. 3 检测方法
1. 3. 1 流式细胞仪检测外周血 CD4 + CD25 + Treg 的比例  无菌操作静脉取血 2  ml，EDTA 抗凝。标本管编号 A，取两只流式专用管 A1、A2，A2 管加入 CD4-Per-
CP、CD25-FITC 各 50 μl。再在 A1、A2 管中分别加入全血100 μl，混匀，置37 ℃ 水浴箱，避光孵育15 min 后加入溶血素 2  ml，室温避光孵育 10  min。3000  r / min离心 5  min，弃上清液。然后用 PBS  2  ml 洗涤细胞 2次，3000 r / min 离心 5 min，弃上清液。0． 5 ml 的 1% 多聚甲醛重悬细胞，待上机检测。

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