l 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中兔蛋白激酶A（PKA）的含量。

l 有效期：6个月

l 保存条件：2-8℃

l 本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被兔蛋白激酶A（PKA）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的兔蛋白激酶A（PKA）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

性能特点

1．特异性强：不与其它细胞因子反应。

2．重复性好：板内、板间变异系数均小于10%。

3．稳定性高：实验效果很稳定。

4．超灵敏度：*小的检测浓度小于1号标准品，稀释度和样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
操作流程

三、“PKA,原装兔蛋白激酶Aelisa试剂盒现货”具体操作方法

以双抗体夹心法为例展示：

1、双抗体夹心法检测抗原         

操作步骤如下：

1）将特异性抗体与固相载体结合，形成固相抗体。洗涤除去尚未结

合的抗体及一些杂质。

2）加入待测标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。

3）加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。

4）加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBeAg、HBsAg、hCG 、AFP等。只要获得针对受检抗原的特异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标所使用的抗体分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步检测。

在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成"夹心复合物"。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值相同，如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质（例如血清中 HBsAg、AFP 和尿液 hCG 等）时，应注意可测范围的值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。

四、客户收集样品要求

  ·客户需提供待检测抗体和包被用抗原。

  ·检测的样本为细胞培养上清、人和动物的血清、血浆。

  ·样本收集后应立即-20℃保存，若长期保存应-70℃。

  ·样本量的要求：若一个指标做复孔检测应不少于250ul，做单孔检测应不少于120ul。建议若客户样本量充足提供500ul以上。

   ·客户的样本收集后，立即按要求保存，切忌反复冻融。外地客户邮寄需要用干冰运输。邮寄前请与技术支持沟通确认。

五、Elisa试剂盒组成

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶

2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（480ng/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶

4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份

5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张

6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个

六、Elisa试剂盒标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

七、操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

240ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液

120ng/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液

60ng/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液

30ng/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液

15ng/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
订购说明

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