l 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中小鼠可替宁（Cotinine）的含量。

l 有效期：6个月

l 保存条件：2-8℃

l 本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠可替宁（Cotinine）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠可替宁（Cotinine）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

操作流程

大部分ELISA 检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP 为标记的ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。一般说来，在5 天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合，使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的需－20℃保存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。

　　抗凝不完全的标本因纤维蛋白原的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是肝素抗凝剂。

1.血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存，应在-70℃以下。

2.在使用微量加样器时，吸取不同瓶子中液体后要更换枪头，即使吸取标准品溶液。

3.吸取液体时速度不易太快，以免产生气泡，吸取的量不够准确。

4.样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶，如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。1．5 吸取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸，减少误差。

5.液体全部加入酶标孔后，将酶标板放在桌子上平行轻轻摇晃30s，使液体充分混合均匀，也使其得到充分的反应。

6.孵育时要使盖板膜封好酶标板，防止水分蒸发，以防曲线不成线性。

7.实验前30min将试剂盒中的所有试剂从冰箱取出，使试剂盒中的所有试剂与提取好的样品溶液的温度相同，酶标板只要取出所需量。

8.由于底物显色剂对光及其敏感，因此要避光保存。

要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色

9.手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15～30s，不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中，防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。

10.检测吸光度前应将酶标仪打开，将其预热30min以上。

11.底物为TMB，避免与皮肤相接触。终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性，应尽量避免接触皮肤。

12.孵育的时间应该严格按照试剂盒说明书上的时间为准。

13.要尽量做双孔实验，这样才既能保证数据的准确性，又能反映出试剂盒的精密度。

14.冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。

15.对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行验证。

16.没有去离子水或双蒸水时，可以使用娃哈哈纯净水配制溶液，切勿使用自来水。

17.标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测。
代测服务

Cotinine,原装小鼠可替宁elisa试剂盒免费代测代测相关信息

 一、代测范围

1、本公司网站*新公布的试剂盒，可以提供代测服务。

2、本公司网站上尚未列出的试剂盒，可以代为研发和测定，费用等相关信息电话咨询。  

二、公司责任

1、对于客户提供的样品和要测定的指标，及时提供规范的检测报告，确保数据真实可靠。未经客户允许，不得相关信息透露给第三方。

2、对于公司网站上列出的试剂盒测定指标，我们将在收到样品之日起13个工作日内提供规范的检测报告；反之，提供检测报告的时间由双方协商决定。

3、本公司的检测报告仅对收到的样品负责。为了确保测定结果有效，请客户在送检前与本公司客服人员沟通，并且按照要求做好样品的数量、标签和寄送等相关事宜。

4、客户如果对测定结果不满意，务必在收到检测报告之日起起5个工作日内与本公司客服人员联系，商定解决办法。

5、在收到客户检测费起5个工作日内快递寄送加盖公章的纸质检测报告和发票。

 三、客户责任

 1、提供样品的性质（物种和组织等）和处理状况（有无特殊的化学处理等），确保样品数量和标签无误，以符合要求的方式进行包装和寄送（注意加足够的冰袋冷藏，特别娇贵的样品请用干冰）。

2、及时付款。一般在寄送样品时付费用的70%，收到电子版检测报告，确认无误后付剩下的30%。如有特殊情况需双方协商决定。

3、以上单个样品测定价格包括预测费用、试剂费用、人工费用和数据处理费用以及蛋白质含量测定费用。由于统计处理需要，一般处理每个样品应该至少测定三次（强烈建议）。如果样品中已经包括三次或三次以上重复，或者用户不需要重复测定，请用户声明。如果测定样品数量很多，可以在测定的总费用上进行适当的减免。 四、代测的优势

 1、将要测定的样品都是有研发该试剂盒的专家全权负责的，因此可以确保测定结果的准确性。

2、节省客户的宝贵时间和精力。

 3、交给我们代测，您可以不必为操作经验的不成熟和仪器的缺乏而苦恼。

五、附加免费服务

 1、根据客户研究目的，免费提供专业的检测意见和建议。

2、免费提供样品蛋白质含量测定。

3、免费提供测定结果分析，包括显著性差异、指标变化的生理生化意义和相关指标变化之间的关系等。

为何选择本公司Cotinine,原装小鼠可替宁elisa试剂盒免费代测？

我司是一家专业从事“产品研发生产、市场销售、技术服务”为一体的高科技生物技术公司，公司生产的产品质量有保证，含量高，能够给实验带来准确的结果。同时试剂随货附带质检报告和图谱，能为用户更好的解决各种疑难问题。如有需要可联系我司销售人员，我们将竭诚为您服务。