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鸡传染性法氏囊病酶联免疫分析
点击次数:540 发布时间:2013/3/8 10:41:05
鸡传染性法氏囊病酶联免疫分析
试剂盒使用方法
使用目的:
本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中传染性法氏囊病(IBD)表达。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡传染性法氏囊病(IBD)表达。用纯化的抗体包被
微孔板,制成固相抗体,可与样品中传染性法氏囊病(IBD)相结合,经洗涤除去未结合的
抗原和其他成分后再与HRP 标记的抗体结合,形成抗体-抗原-抗体复合物,经过彻底洗涤
后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的
黄色。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),与CUTOFF 值相比较,从而判定标
本中鸡传染性法氏囊病(IBD)的存在与否。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 阳性对照 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 阴性对照 0.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1
孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先
加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不
触及孔壁,轻轻晃动混匀,
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此
重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
操作程序总结:
计算和结果判定:
试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10
临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定:样品OD 值< 临界值(CUT OFF)者为传染性法氏囊病(IBD)阴性
阳性判定:样品OD 值≥ 临界值(CUT OFF)者为传染性法氏囊病(IBD)阳性
。
原创作者:里苏(上海)生物技术有限公司