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人结合珠蛋白elisa试剂盒使用说明书

点击次数:563 发布时间:2012/8/13 10:48:43

                       人结合珠蛋白elisa试剂盒使用说明书

公司依据其产品和技术优势,建立了从核酸提取与纯化;基因的克隆与表达;酶联免疫(ELISA)技术;Western blotting技术;实时荧光定量PCR技术;磷脂脂肪酸分析(PLFA)技术;变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术;荧光定量PCR与RT-PCR、蛋白纯化与鉴定,到抗原抗体制备与免疫学检测等一系列服务平台。里苏(上海)生物技术一站式全方位服务定将在您科学研究的道路上助您一臂之力。
使用目的:
  本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中结合珠蛋白(HAP)含量。
elisa试剂盒实验原理
  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人结合珠蛋白(HAP)水平。用纯化的人结合珠蛋白(HAP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入结合珠蛋白(HAP),再与HRP标记的结合珠蛋白(HAP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的结合珠蛋白(HAP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人结合珠蛋白(HAP)浓度。
elisa试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品(480μg/ml) 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
elisa试剂盒操作步骤
标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
温育:操作同3。
洗涤:操作同5。
显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

原创作者:里苏(上海)生物技术有限公司

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