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人(human)肿瘤坏死因子a(TNF-a)
人(human)肿瘤坏死因子a(TNF-a)
本试剂盒仅供研究使用 标本:血清或者血浆
一、 试 剂 组 成
精密度微孔板96孔 (Microtitration Strips) 1块 2~8℃干燥保存
酶标偶合液 (Conjugate ) 1瓶 12.0毫升 2~8℃冷藏保存
标准品 (Standard) 5瓶 各1.0毫升 2~8℃冷藏保存
呈色剂A (Substrate A) 1瓶 6.0毫升 2~8℃避光冷藏保存
呈色剂B (Substrate B) 1瓶 6.0毫升 2~8℃避光冷藏保存
终止液 (Stopping Solution) 1瓶 6.0毫升 室温保存
20倍浓缩洗涤液 (Rinsing Buffer x 20) 1瓶 60.0毫升 2~8℃冷藏保存
5倍浓缩样品稀释液 (Diluent x 5) 1瓶 15.0ml 2~8℃冷藏保存
英文说明书,中文说明书 各一份 室温保存
二、注意事项
1. 此试剂为体外检测试剂,效期内使用,试剂应视为传染物,不同总批号的试剂不能混用。
2. 使用前应将盒内各试剂取出。室温放置至少30分钟,
3. 浓缩洗涤液出现结晶后,请于37℃孵育15分钟。
4. 浓缩样品稀释液出现结晶后,请于37℃孵育15分钟
5. 若24小时内进行实验,标本可存放于2~8℃。不需及时实验,标本-20℃保存,避免反复冻融。
6. 在反复清洗微孔板,并扣干微孔中的残余液体,否则将降低精确度,造成吸光度偏离的假像。
7. 加样完毕后,应注意轻微摇动微孔反应条,以便使孔中的液体充分混匀。
8. 试剂盒保存于2~8℃,请勿冷冻,有效期请见盒内标示。
三、elisa试剂盒实验前准备
1.使用前应将盒内各试剂取出,室温放置至少30分钟。
2.准备各种实验仪器及材料,如微量移液器,吸头,医用蒸馏水等
3.浓缩洗液与医用蒸馏水1︰19倍稀释后成为应用洗涤液
4.浓缩样品稀释液与医用蒸馏水1︰4倍稀释成应用样品稀释液
5.用应用样品稀释液来稀释样品,按照1:100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中,充分混匀待用。)
四、操 作 步 骤
1.取出酶标板,设空白孔,依照次序对应分别加入100μl的标准品于空白微孔中(空白孔视为0号标准品,用医用蒸馏水替代)
2、分别标记样品编号,加入100μl的稀释样品于空白微孔中(不同的样本采用不同的吸头)。
3、将酶标板置于37℃温育30分钟;
4、将酶标板板取出,将其中的液体甩去,每个孔中全部加满应用洗涤液后,立即甩去液体;
5、每个孔中加满应用洗涤液后,轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去,在吸水纸上将酶标板拍干。
6、重复第5个步骤5次,在吸水纸上将酶标板拍干。
7、在标准品孔和样品孔中加入100μl的酶标偶合溶液。
8、将96孔板置于37℃温育30分钟。
9、将酶标板取出,将其中的液体甩去,每个孔中全部加满应用洗涤液后,立即甩去液体。
10、每个孔中再次加满洗涤应用液后,室温轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去,在吸水纸上将酶标板拍干。
11、重复第5个步骤5次,在吸水纸上将酶标板拍干。
12、在每个孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。轻轻振荡混匀。(A液、B液采用不同的吸头加样)
13、将酶标板置于37℃避光温育反应15分钟。
14、每个微孔中加入50μl的终止液,轻轻振荡混匀。
15、在酶标仪上,450nm处测定OD; 显色后,15分钟内进行测定。
16、根据制备的标准曲线,计算样本含量
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