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小鼠半胱氨酸蛋白酶-3elisa试剂盒说明书

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上传时间:2012/9/13 9:43:36

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上 传 者:上海沪峰化工有限公司

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                                   小鼠半胱氨酸蛋白酶-3elisa试剂盒说明书

上海沪峰是一家专业研发,经营生物、仪器、试剂、耗材的公司,是一家经国家相关部门批准注册的企业。主要经营许多水平的高科技产品,包括各种试剂,ELISA试剂盒,氨基酸、分离试剂、蛋白质、碳水化合物、植物激素、表面活性剂、缓冲液、染色液,抗生素、维生素和酶类,仪器仪表,标准对照品,实验试剂,试管,滴管,培养皿等及应用领域等产品
小鼠elisa试剂盒使用目的:
  本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)含量。
小鼠elisa试剂盒实验原理
  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)水平。用纯化的小鼠半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3),再与HRP标记的半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)浓度。
小鼠elisa试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品(160 pmol/L) 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
80 pmol/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
40 pmol/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
20 pmol/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
10 pmol/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
5 pmol/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
温育:操作同3。
洗涤:操作同5。
显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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