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Human lymphotoxinβ,LTB ELISA Kit
标本的采取和保存：
可用作 ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清),分泌物(唾液)和排泄物(如尿液,粪便)等。均可作标本以测定其中某种抗体或抗原 成份.有些标本可直接进行测定(如血清,尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物).大部分ELISA检测均以血清为标本 .血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清.制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固,血块收缩后即可取得.除特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本.在ELISA中血浆和血清可同等应用.血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色.血清标本宜在新鲜时检测.如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应.如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深.一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存.冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡.混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测.反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存.保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂.
ELISA 试验时，注意事项如下：
1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以实验结果的性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:
(1) 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的*适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg／ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量*少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入
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