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人胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒
点击次数：249发布时间：2012/1/11 13:15:02
更新日期：2022/8/20 18:55:11
所 在 地：中国大陆
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人胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒《《注意事项》》：
1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以实验结果的性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:
(1) 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的*适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg／ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量*少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。
人胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒《《试剂》》
(1) 包被缓冲液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液):
NaHCO３ 1.59克
NaHCO３ 2.93克
加蒸馏水至1000ml
(2) 洗涤缓冲液(PH7.4PBS)：0.15M
KH2PO4 0.2克
Na2HPO４·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克 KCl 0.2克
Tween-20 0.05％ 0.5ml
加蒸馏水至1000ml
(3) 稀释液：
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗涤缓冲液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10％使用。
(4) 终止液(2M H２SO４)：
蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98％)21.7ml。
(5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸枣柠檬酸):
0.2MNa２HPO４(28.4克／L)25.7ml
0.1M柠檬酸(19.2克／L) 24.3ml
加蒸馏水50ml。
(6) TMB(四甲基联苯胺)使用液:
TMB(10mg／5ml无水乙醇)0.5ml
底物缓冲液(PH5.5) 10ml
0.75％H２O２ 32μl
(7) ABTS使用液:
ABTS 0.5mg
底物缓冲液(PH5.5) 1ml
3％H２O２ 2μl
(8) 抗原、抗体和酶标记抗体。
(9) 正常人血清和阳性对照血清。
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