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人基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)ELISA试剂盒
点击次数：198发布时间：2012/1/11 12:18:20
更新日期：2022/8/20 18:55:11
所 在 地：中国大陆
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详细内容
人基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)ELISA试剂盒《《操作步骤》》：
用于检测未知抗原的双抗体夹心法
1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。 2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
人基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)ELISA试剂盒 《《试剂》》
(1) 包被缓冲液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液):
NaHCO３ 1.59克
NaHCO３ 2.93克
加蒸馏水至1000ml
(2) 洗涤缓冲液(PH7.4PBS)：0.15M
KH2PO4 0.2克
Na2HPO４·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克 KCl 0.2克
Tween-20 0.05％ 0.5ml
加蒸馏水至1000ml
(3) 稀释液：
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗涤缓冲液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10％使用。
(4) 终止液(2M H２SO４)：
蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98％)21.7ml。
(5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸枣柠檬酸):
0.2MNa２HPO４(28.4克／L)25.7ml
0.1M柠檬酸(19.2克／L) 24.3ml
加蒸馏水50ml。
(6) TMB(四甲基联苯胺)使用液:
TMB(10mg／5ml无水乙醇)0.5ml
底物缓冲液(PH5.5) 10ml
0.75％H２O２ 32μl
(7) ABTS使用液:
ABTS 0.5mg
底物缓冲液(PH5.5) 1ml
3％H２O２ 2μl
(8) 抗原、抗体和酶标记抗体。
(9) 正常人血清和阳性对照血清。
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