酶联免疫吸附实验（ELISA）是一种常用的固相免疫测定方法，被广泛应用于各种抗原和抗体的测定。《全国艾滋病检测技术规范》（2009年修订版）中要求：各筛查实验室在进行抗体检测时，先用种筛查试剂（高敏感性ELISA）检测，出现阴性反应报告“HIV抗体阴性”，出现阳性反应时不可直接报告阳性结果，则用另一种不同原理或不同厂家的筛查试剂（高特异性ELISA）复检，所以ELISA法目普遍用于艾滋病病毒抗体（HIV抗体）初筛实验室用于HIV抗体的测定，但ELISA测定中影响因素较多，而且对检验人员的操作技术要求也较高，因此，为了得到准确可靠的检验结果，必须对ELISA法中的诸多影响因素采取相应的控制措施。目，HIV抗体初筛实验室常用的是血液标本。血液标本常见的干扰因素有内源性干扰和外源性干扰。

 

内源性干扰因素：包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白、异嗜性抗体等，这些因素的存在，常使结果出现假阴性或假阳性等偏差，针对这些问题，解决办法：（1）用0.01mol/L，pH7.2PBS（磷酸盐缓冲液）将标本做1:1稀释；（2）温度56℃、时间30min将血清灭活。

 

外源性干扰因素：外源性干扰物质常常是由于血液标本在采集、保存、运送等过程中操作不当所造成，比如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间久、标本凝集不全或加入抗凝血物质等。针对这些问题，解决办法：（1）尽量避免样品溶血；（2）标本采集后应室温下自然防置1h～2h，待血液凝固、血块收缩后再用1500~3000r/min离心15min，吸出血清；（3）血清标本应立即进行测定，对于不能立即测定的标本，需2℃~8℃保存，超过一周以上测定的标本应-20℃以下保存；（4）标本中加入抗凝物质时，尽量避免使用酶抑制剂，以免造成对ELISA中酶活性的影响。

 

试剂的选择：应使用经国家食品药品监督管理局注册批准的、敏感性高、特异性好的试剂；更换试剂批号时，应进行平行试验；试剂盒严格控制在有效期内使用。

 

试剂的预处理：在ELISA法测定时试剂的预处理非常关键，也是较容易忽略的一个步骤，具体的做法：每次试验，将试剂盒从冰箱内取出，室温下放置20min～30min，使试剂盒在使用与室温基本平衡一致，以免影响到抗原抗体的结合与反应的速度。

 

温度：是ELISA法测定中为重要的一个问题，它直接决定着试验的成败，所以在HIV抗体测定中一定要注意温度的控制。ELISA以酶催化底物显色来判断结果，而抗原与抗体的合和酶催化底物的效率均与温度密切相关，温度高，显色深，S/CO值高，反之，显色浅，S/CO值低，影响结果的准确性。

 

在日常实际操作时，常忽略从室温平衡的温度逐步上升到37℃需要17min。为保证37℃下有足够的反应时间，各实验室可自行确定本实验室不同季节微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃，从而适当延长反应板在恒温箱中的放置时间。具体的做法是，用一小温度计单独放置在非检测样品的空白板孔溶液中测量观察。

 

加样操作：加样时注意不要有气泡，将样品加于酶标板孔底部，尽量不要触及孔壁，加完后轻轻晃动混匀，并在酶标板上加覆膜。

 

洗涤与浸泡：反应板的洗涤次数及浸泡时间的长短，也直接影响着检测结果，一般洗涤5～6次，浸泡时间每次为50s，洗涤次数过多或过少、浸泡时间过长或过短容易造成假阴性或假阳性。

 

酶标仪读板：每次测定标本吸光度，要将酶标仪开机预热不低于20min，而且要在15min

 

内判读完毕。

 

室内质控品：是非试剂盒组份的外部质控品，用来判断本次实验样品检测的有效性。可以是商品或实验室自行制备。以该试剂盒临界值（Cut-off）的2-3倍为宜。每次试验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重新实验。

 

对于我们每一位检验人员来说，不管是检验标本，还是检验试剂、试验温度、仪器设备等等，只要把握好每个环节，就可以消除ELISA法在检测HIV抗体中的诸多影响因素，就能保证为每位检测者提供准确可靠的检测结果。