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ELISA试验洗涤步骤注意事项-上海恒远
点击次数：14864 发布时间：2016/8/30 9:27:26
ELSIA 就是靠洗涤来达到分离游离的和结 合的酶标记物的目的。 通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性 地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等 塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的 干扰物质洗涤下来。可以说在 ELISA 操作中，洗涤是*主要 的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按 要求洗涤，不得马虎。 洗涤的方式除某些 ELISA 仪器配有特殊的自动洗涤仪外，手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种，过程如下：
（1）浸泡式ELISA 洗涤：
a.吸干或甩干孔内反应液；
b.用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去）；
c.浸泡，即将洗 涤液注满板孔，放置 1-2 分 钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；
d.吸干孔内液体。吸干应彻底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸 上拍干；
e.重复操作 c 和 d，洗涤 3-4 次（或按说明规定）。
在间接法中 如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。 微量滴定板多采用浸泡式洗涤法。洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是 疏水性的，非离子型洗涤 剂既含疏水基团，也含亲水基团，其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合，从而削弱蛋白质与固相载体的结合，并借助于亲水基团 和水分子的结合作用，使蛋白质回复到水溶液状态，从而脱离固相载体。 洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是吐温 20，其浓度可在 0.05%-0.2%之间，高于 0.2%时，可使包被在固相上的抗原或 抗体解吸附而减低试验的灵敏度。
（2）流水冲洗式ELISA 洗涤，流水冲洗法*初用于小珠载体的洗涤，洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置，使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗 ，持续冲洗 2 分钟后，吸干液体，再用蒸馏水浸泡 2 分钟，吸干即可。
浸泡式犹如盆浴，流水冲洗式则好比淋浴，其洗涤效果更为彻底，且也简便、 快速。已有实验表明，流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压，让水流冲击板孔表面，洗涤效果更佳。
原创作者：上海恒远生物技术发展有限公司
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