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技术文章
恒远福利!10月总结ELISA工作手册公布
点击次数：14930 发布时间：2017/11/1 10:13:08
今天是11月的天，我公司开展了一个ELISA总结讨论会。今天将结果分享给大家，上海恒远生物福利来了！10月总结ELISA工作手册公布：
·根据实验设计，选择和订购合适的elisa试剂盒。
·根据实验目的设计合理的样品实验排板，预留标准品，(+)和(-)对照，空白对照位置，样品位置，所有对照样品和待测样品均需要实验复孔。
·实验前确认ELISA平台稳定，仪器设备正常工作，试剂耗材足够实验需要。
ELISA板包被实验操作流程
1.碳酸盐包被缓冲液：50mM碳酸缓冲液，pH 9.6，4℃保存。称取Na2CO3 0.15 克，NaHCO3 0.293克，蒸馏水溶解，定容至100 ml。
2.包被抗原：
·用50mM的碳酸盐包被缓冲液(pH 9.6)溶解抗原，稀释抗原浓度为10-20μg/ml，96孔酶标板每孔加入100μl，4℃放置一个晚上。
·第二天弃去包被液后，PBST洗涤3次，直接后续实验或者冰箱保存。
·包被细胞
① 在96孔培养板上接种细胞，2E4 cells/well，37℃放置一个晚上培养。
② 第二天用PBS洗涤培养板2-3次。
③ 每孔加入125μl 10% Formalin(1:10稀释)，室温下固定15 min。
④ 用灭菌水洗涤培养板3次，晾干后储藏在2- 8℃备用。
结果的判定
严格依据试剂盒提供的阳性判定值(CO)进行结果判定。厂商提供试剂的同时，说明书上列出的CO值是建立在一系列科学试验及统计研究的基础上，不应随意更改。定量测定需要制备标准曲线，根据标准曲线计算结果。
室间质量评价(EQA)
EQA是一种回顾性评价，主要是控制实验室结果的准确性。其要点是保证同一患者的标本一样对待室间质评物，必须强调的是EQA结果必须同IQC一并分析，找出原因，改进工作中的不足，同时指导实验室选择合适的试剂盒。
综上所有内容，我公司技术人员说：ELISA检测操作步骤复杂，可能会影响测定结果的因素较多，分布在测定操作的各个步骤中，因此必须加强各环节的质量控制，才能得到准确可靠的检测结果。
原创作者：上海恒远生物技术发展有限公司
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