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技术文章
ELISA新手操作实验之前需要做哪些准备?
点击次数:14848 发布时间:2018/3/21 11:02:07
近些年来,ELISA方法发展很快,elisa试剂盒有着高特异性、灵敏性等优点,接触ELISA实验的科研检测员也越来越多,那么ELISA新手操作实验之前需要做哪些准备?
①标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备 份。短期内无法实验者,注意低温保存。
②备好所有实验额外所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等。
③根据检测标本数量确定所需试剂的量。
④按说明书将所用试剂平衡至室温,配制所需试剂。
⑤ 选择抗体时选择一个单抗和一个多抗进行配对;若选择两个单抗,必须识别不 同表位的抗体;从同一家公司选择抗体对。
⑥ ELISA实验中为了确定*佳信号和背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体 (0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时,应包括在适当范围内的标准品的 系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
⑦一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml 到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统 可在一定范围内提高灵敏度。
⑧若使用过氧化物酶作为显色系统,应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑 制过氧化物酶的活性。
⑨标准品的配制:对于每种细胞因子应仔细阅读说明书,注意每批的细节。在使用细 胞因子前,瞬时离心试剂瓶,尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节 ,将冻干的细胞因子复溶。
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相关ELISA实验的准备,除了以上说明的之外,上海恒远公司建议大家仔细阅读说 明书,并确定试剂盒在有效期内容,按说明书确定所有试剂齐全(数量、体积)。
原创作者:上海恒远生物技术发展有限公司